CY7-Dextran，Cy7-葡聚糖，Cy7荧光偶联葡聚糖 远红外荧光探针，适配深层组织与药物递送追踪
CY7-Dextran（Cy7-葡聚糖、Cy7荧光偶联葡聚糖）是一种远红外荧光标记探针，通过共价键将Cy7荧光染料与葡聚糖分子稳定偶联，融合了Cy7染料的远红外荧光特性与葡聚糖的生物相容性、水溶性、可降解性优势，荧光发射波长约760-780nm，激发波长约740-760nm，处于近红外光谱区，生物组织穿透能力强，背景荧光干扰低，可有效避免生物样本自发荧光的影响，广泛应用于深层组织成像、小动物活体成像、细胞标记与追踪、药物递送系统监测、糖-蛋白相互作用研究等科研领域。本使用说明详细阐述其使用流程、操作规范、注意事项及实验优化建议，确保实验操作安全、结果准确，同时补充不同实验场景的适配细节，满足各类科研需求。
一、试剂基本信息。
本品外观为深绿色至蓝绿色固体或溶液，纯度≥95%，荧光稳定性优良，光漂白速率低，适合长时间动态追踪实验，荧光量子产率高，荧光信号明亮且稳定，可实现精准的荧光示踪。葡聚糖骨架分子量范围广泛（常见1kDa-200kDa），不同分子量的CY7-Dextran在溶液中的黏度、扩散速度、细胞摄取效率等存在差异，可根据实验需求灵活选择：小分子量（1-10kDa）适合细胞内小分子转运、胞吞过程研究；中分子量（20-100kDa）适合血管通透性研究、药物载体标记；高分子量（100kDa以上）适合组织支架成像、大分子转运研究。试剂溶解性良好，可快速溶解于去离子水、PBS缓冲液等水相体系，也可溶于DMSO、DMF等极性有机溶剂，在非极性有机溶剂中溶解性较差。储存条件为-20℃干燥避光密封保存，避免反复冻融，开封后建议1个月内用完，未开封试剂保质期为12个月，储存时需远离热源、氧化剂及氨基类试剂，防止荧光降解或偶联键断裂，可分装成小份储存，减少反复冻融对试剂的损伤。
二、实验前准备。
1. 试剂预处理：使用前将试剂从-20℃冰箱取出，放置于室温回温20-30分钟，待试剂恢复至室温后再进行称量或稀释，避免因温度骤变导致试剂结块、荧光分子变性；若为固体试剂，需在无菌、避光条件下精准称量，称量后迅速密封剩余试剂，防止吸潮、光照降解或污染。2. 溶液配制：根据实验需求配制工作液，常规浓度范围为1-10μg/mL（活体成像）、5-20μg/mL（细胞实验），推荐使用无菌PBS缓冲液（pH7.4）或去离子水配制，若需用于疏水体系，可先用少量DMSO溶解后，再用缓冲液稀释至目标浓度，稀释过程中轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡，防止葡聚糖骨架断裂或荧光淬灭。配制完成后，可通过0.22μm无菌滤膜过滤，去除杂质与微生物，确保实验体系无菌，过滤后的工作液需立即使用，放置时间不超过2小时，若需短期保存，可置于4℃避光条件下，保存时间不超过12小时。3. 实验器材准备：提前将离心管、移液枪、培养皿、活体成像系统、荧光显微镜、透析袋等实验器材灭菌处理，所有接触试剂的器材需确保无氨基、巯基等活性基团污染，避免与试剂发生非特异性反应；活体成像系统需提前调试，选择适配Cy7的激发滤光片（740-760nm）与发射滤光片（760-780nm），预热10-15分钟，校准成像参数；荧光显微镜需调试至远红外成像模式，确保荧光信号清晰可辨；透析袋需提前用去离子水浸泡，去除杂质。
三、操作步骤。
（一）深层组织成像实验。
1. 组织样本制备：取新鲜的动物组织样本（如肿瘤组织、肝脏组织、肾脏组织），用生理盐水冲洗干净，去除血液及杂质，切成厚度为50-100μm的冰冻切片或石蜡切片，冰冻切片可直接用于染色，石蜡切片需进行脱蜡、水化处理。
2. 荧光染色：将组织切片置于培养皿中，加入配制好的CY7-Dextran工作液，确保工作液完全覆盖切片，在室温、避光条件下孵育1-2小时，孵育过程中可轻轻摇晃培养皿，确保试剂均匀分布。
3. 清洗与封片：孵育结束后，用PBS缓冲液冲洗切片3-4次，每次冲洗后静置1-2分钟，彻底去除未结合的游离试剂，避免背景荧光干扰；冲洗完成后，用抗荧光淬灭封片剂封片，防止荧光信号衰减。
4. 成像观察：将封片后的切片置于荧光显微镜下，调节激发光强度、曝光时间等参数，观察组织内荧光分布情况，记录实验图像，可结合图像分析软件进行荧光强度定量分析，评估试剂在组织中的分布情况。
（二）活体成像与药物递送追踪。
1. 动物预处理：将实验动物（如小鼠、大鼠）称重、标记，麻醉后固定于活体成像系统的载物台上，剃去实验区域毛发，必要时涂抹脱毛膏，确保成像区域无毛发遮挡。
2. 试剂注射：将配制好的CY7-Dextran工作液按1-5mg/kg体重的剂量，通过尾静脉缓慢注射，注射速度控制在0.1-0.2mL/min，避免血管损伤或试剂外漏；若为局部给药，可直接将试剂注射到目标部位（如肿瘤组织）。
3. 成像与监测：注射后不同时间点（如1h、3h、6h、12h、24h），将动物置于活体成像系统中，拍摄荧光图像，记录试剂在体内的分布、富集及代谢情况；可通过成像软件定量分析荧光强度，评估药物递送载体的靶向效率或试剂在体内的代谢速率，实验过程中设置空白对照组，排除背景荧光干扰。
4. 实验后处理：成像结束后，按动物伦理规范处理动物，若需长期监测，可将动物放回饲养环境，定期进行成像。
（三）细胞标记与追踪实验。
1. 细胞培养：将待标记细胞接种于无菌培养皿中，加入适宜的细胞培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中培养至细胞汇合度达到70%-80%，确保细胞活力良好。
2. 荧光标记：吸弃旧培养基，用PBS缓冲液轻轻冲洗细胞2-3次，去除残留培养基；加入配制好的CY7-Dextran工作液，在37℃、5%CO₂培养箱中避光孵育3-6小时，孵育时间可根据细胞类型调整。
3. 清洗与检测：孵育结束后，用PBS缓冲液冲洗细胞3-4次，去除未被细胞摄取的游离试剂；可通过荧光显微镜观察细胞内荧光分布，或通过流式细胞仪定量检测细胞摄取效率；若需追踪细胞迁移，可在标记后进行细胞划痕实验，定期观察荧光分布变化，记录细胞迁移情况。
四、注意事项。
1. 避光操作：Cy7荧光分子对光照敏感，全程需在避光条件下进行，包括试剂称量、溶液配制、孵育、清洗及成像等步骤，可使用锡箔纸包裹容器，实验环境选择暗室或弱光环境，避免强光直射导致荧光光漂白；成像时曝光时间不宜过长，防止荧光信号衰减。
2. 浓度控制：工作液浓度需根据实验场景调整，活体成像浓度过高可能导致荧光淬灭或脏器毒性，浓度过低则荧光信号微弱，无法准确检测；细胞实验浓度可适当提高，但需控制在5-20μg/mL，避免细胞毒性；建议实验前进行预实验，确定工作浓度。
3. 无菌操作：实验过程中需严格遵循无菌操作规范，防止试剂污染，若试剂不慎污染，应立即丢弃，不可继续使用；接触试剂的器材需单独使用，避免与其他试剂交叉污染，尤其是氨基类、巯基类试剂，防止发生非特异性反应。
4. 储存与处理：剩余试剂需密封后立即放回-20℃冰箱，建议分装成小份储存，避免反复冻融；实验结束后，废弃的试剂及耗材需按照生物安全规范处理，含试剂的废液需收集后进行无害化处理，固体废弃物需密封后交由专业机构处理；标记后的细胞或组织样本，短期可置于4℃避光保存，长期需置于-80℃密封保存，避免反复冻融。
5. 干扰因素：实验体系中应避免存在过量的氨基、巯基等活性基团，此类基团可能与CY7-Dextran发生非特异性结合，影响标记效果；同时避免使用强酸、强碱缓冲液，建议使用pH7.0-7.5的缓冲液，防止破坏偶联键；深层组织成像时，需控制切片厚度，避免切片过厚导致荧光信号衰减；活体成像时，需避免动物毛发、皮肤分泌物等遮挡成像区域。
五、应急处理。
1. 皮肤接触：若试剂接触皮肤，立即用大量流动的清水冲洗接触部位15-20分钟，若出现红肿、瘙痒等不适，及时就医。
2. 眼睛接触：若试剂溅入眼睛，立即用大量生理盐水冲洗眼睛20分钟以上，期间转动眼球，确保眼睛各部位均被冲洗，随后及时就医。
3. 误食：若不慎误食，立即催吐，并及时就医，告知医生试剂名称及成分，不可自行用药。
4. 试剂泄漏：若试剂发生泄漏，立即用吸水纸吸干泄漏物，并用酒精擦拭污染区域，密封泄漏物后按危险废弃物处理，处理时佩戴手套、口罩等防护用品，避免直接接触泄漏物。
六、补充说明。
本品仅用于科研实验，严禁用于人体、医疗或诊断用途；Cy7的远红外荧光特性使其特别适合深层组织成像和活体追踪，相较于可见光荧光染料，可有效减少生物背景干扰，提升成像质量；不同分子量的CY7-Dextran适配不同实验场景，实验前需根据具体研究目的选择合适的分子量；实验过程中可通过透析、凝胶过滤等方法纯化标记产物，提高标记纯度；若需进行多色荧光成像，可与Cy3、FITC等染料配合使用，注意选择激发波长与发射波长不重叠的染料，避免荧光干扰；标记后的药物载体，可通过活体成像系统实时监测其在体内的分布和代谢，为药物递送系统的优化提供依据；相关实验可参考荧光成像技术规范，优化孵育时间、工作液浓度等参数，确保实验结果的可靠性和可重复性。
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