CY7.5-Dextran，Cy7.5标记葡聚糖 近红外深层成像探针，适配活体追踪与药物载体示踪
CY7.5-Dextran（Cy7.5标记葡聚糖）是一种近红外荧光标记探针，通过共价偶联将Cy7.5荧光染料与葡聚糖分子连接，兼具Cy7.5染料的深组织穿透能力与葡聚糖的生物相容性、水溶性优势，荧光发射波长约775-815nm，激发波长约750-770nm，处于肌体组织近红外窗口I区域（700-900nm），此区域生物组织背景荧光弱、穿透性强，可有效减少生物背景干扰，显著提升成像信噪比，广泛应用于小动物活体成像、深层组织成像、药物递送载体追踪、细胞摄取与代谢研究等科研领域。本使用说明详细介绍其使用方法、操作要点、注意事项及实验优化建议，确保实验操作规范、结果可靠，同时补充活体成像的专属技巧，助力科研实验高效开展。
一、试剂基本信息。
本品外观为绿色至深绿色固体或溶液，纯度≥95%，荧光量子产率约0.10，消光系数高达223000 L·mol⁻¹·cm⁻¹，荧光亮度高、光稳定性优良，适合长时间动态追踪实验。葡聚糖骨架分子量可按需选择（常见5kDa、10kDa、20kDa等），均具有良好的水溶性和生物可降解性，可与多种功能基团（如药物、配体）共价连接，构建靶向递送平台。试剂溶解性良好，可溶解于去离子水、PBS缓冲液等水相体系，也可溶于DMF、DMSO等有机溶剂，在非极性有机溶剂中溶解性较差。储存条件为-20℃干燥避光密封保存，避免反复冻融，开封后建议1个月内用完，未开封试剂保质期为12个月，储存时需放置于防潮、防光照的试剂柜中，远离热源、氧化剂及氨基类试剂，防止荧光降解或偶联键断裂。
二、实验前准备。
1. 试剂预处理：使用前将试剂从-20℃冰箱取出，放置于室温回温20-30分钟，待试剂恢复至室温后再进行称量或稀释，避免因温度骤变导致试剂结块、荧光分子变性；若为固体试剂，需在无菌、避光条件下精准称量，称量后迅速密封剩余试剂，防止吸潮、光照降解或污染。2. 溶液配制：根据实验需求配制工作液，常规浓度范围为1-10μg/mL（活体成像）、5-20μg/mL（细胞实验），推荐使用无菌PBS缓冲液（pH7.4）或去离子水配制，若需用于疏水体系，可先用少量DMSO溶解后，再用缓冲液稀释至目标浓度，稀释过程中轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡，防止葡聚糖骨架断裂或荧光淬灭。配制完成后，可通过0.22μm无菌滤膜过滤，去除杂质与微生物，确保实验体系无菌，过滤后的工作液需立即使用，放置时间不超过2小时。3. 实验器材准备：提前将离心管、移液枪、培养皿、活体成像系统、荧光显微镜、透析袋等实验器材灭菌处理，所有接触试剂的器材需确保无氨基、巯基等活性基团污染，避免与试剂发生非特异性反应；活体成像系统需提前调试，选择适配Cy7.5的激发滤光片（750-770nm）与发射滤光片（775-815nm），预热10-15分钟，校准成像参数；荧光显微镜需调试至近红外成像模式，确保荧光信号清晰。
三、操作步骤。
（一）活体成像实验。
1. 动物预处理：将实验动物（如小鼠、大鼠）称重、标记，麻醉后固定于活体成像系统的载物台上，剃去实验区域毛发（如肿瘤部位、脏器区域），必要时可涂抹脱毛膏，确保成像区域无毛发遮挡，减少荧光吸收。
2. 试剂注射：将配制好的CY7.5-Dextran工作液按1-5mg/kg体重的剂量，通过尾静脉缓慢注射，注射速度控制在0.1-0.2mL/min，避免血管损伤或试剂外漏；注射完成后，轻轻按摩动物腹部，促进试剂在体内分布。
3. 成像与监测：注射后不同时间点（如1h、3h、6h、12h、24h），将动物置于活体成像系统中，设置激发波长750-770nm、发射波长775-815nm，调节曝光时间（通常100-500ms），拍摄荧光图像，记录试剂在体内的分布、富集及代谢情况；可通过成像软件进行荧光强度定量分析，评估试剂在目标器官（如肿瘤、肝脏、肾脏）的富集效率，实验过程中需设置空白对照组（未注射试剂的动物），排除背景荧光干扰。4. 实验后处理：成像结束后，将动物妥善处理，若需长期监测，可将动物放回饲养环境，定期进行成像；若实验结束，按动物伦理规范处理动物。
（二）细胞摄取与代谢实验。
1. 细胞培养：将待标记细胞接种于无菌培养皿中，加入适宜的细胞培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中培养至细胞汇合度达到70%-80%，确保细胞活力良好。
2. 荧光标记：吸弃旧培养基，用无菌PBS缓冲液轻轻冲洗细胞2-3次，去除残留培养基；加入配制好的CY7.5-Dextran工作液，确保工作液完全覆盖细胞，在37℃、5%CO₂培养箱中避光孵育3-6小时，孵育时间可根据细胞类型调整，吞噬能力较强的细胞可缩短至2-3小时。3. 清洗与检测：孵育结束后，吸弃工作液，用PBS缓冲液冲洗细胞3-4次，彻底去除未被细胞摄取的游离试剂；可通过荧光显微镜观察细胞内荧光分布，或通过流式细胞仪定量检测细胞摄取效率；若需研究代谢情况，可在孵育后更换新鲜培养基，继续培养不同时间点，检测细胞内荧光强度变化，评估试剂代谢速率。
（三）药物载体标记与追踪。1. 载体标记：将CY7.5-Dextran与药物载体（如纳米颗粒、脂质体）按适宜比例混合，在室温、避光条件下孵育30-60分钟，使CY7.5标记的葡聚糖与载体形成稳定结合，标记完成后，通过透析、离心或凝胶过滤法纯化，去除未结合的游离CY7.5-Dextran，确保载体标记纯度。2. 体内外追踪：体外实验可将标记后的载体加入细胞培养体系，按细胞摄取实验步骤操作，监测载体的细胞摄取、胞内转运及药物释放情况；体内实验可将标记后的载体通过尾静脉注射注入实验动物体内，通过活体成像系统监测载体在体内的分布、靶向性及代谢过程，评估药物递送系统的效率。
四、注意事项。
1. 避光操作：Cy7.5荧光分子对光照敏感，全程需在避光条件下进行，包括试剂称量、溶液配制、孵育、清洗及成像等步骤，可使用锡箔纸包裹容器，实验环境选择暗室或弱光环境，避免强光直射导致荧光光漂白；活体成像时，尽量缩短动物暴露在激发光下的时间，防止荧光信号衰减。
2. 浓度控制：工作液浓度需严格按照实验场景调整，活体成像浓度过高可能导致荧光淬灭或脏器毒性，浓度过低则荧光信号微弱，无法准确检测；细胞实验浓度可适当提高，但需控制在5-20μg/mL，避免细胞毒性；建议实验前进行预实验，确定工作浓度。
3. 无菌操作：实验过程中需严格遵循无菌操作规范，防止试剂污染，若试剂不慎污染，应立即丢弃，不可继续使用；接触试剂的器材需单独使用，避免与其他试剂交叉污染，尤其是氨基类、巯基类试剂，防止发生非特异性反应。
4. 储存与处理：剩余试剂需密封后立即放回-20℃冰箱，建议分装成小份储存，避免反复冻融，防止葡聚糖骨架断裂或荧光染料脱落；实验结束后，废弃的试剂及耗材需按照生物安全规范处理，含试剂的废液需收集后进行无害化处理，固体废弃物需密封后交由专业机构处理；标记后的细胞或组织样本，短期可置于4℃避光保存，长期需置于-80℃密封保存。
5. 干扰因素：实验体系中应避免存在过量的氨基、巯基等活性基团，此类基团可能与CY7.5-Dextran发生非特异性结合，影响标记效果；同时避免使用强酸、强碱缓冲液，建议使用pH7.0-7.5的缓冲液，防止破坏偶联键；活体成像时，需避免动物毛发、皮肤分泌物等遮挡成像区域，确保成像清晰。
五、应急处理。
1. 皮肤接触：若试剂接触皮肤，立即用大量流动的清水冲洗接触部位15-20分钟，若出现红肿、瘙痒等不适，及时就医。
2. 眼睛接触：若试剂溅入眼睛，立即用大量生理盐水冲洗眼睛20分钟以上，期间转动眼球，确保眼睛各部位均被冲洗，随后及时就医。
3. 误食：若不慎误食，立即催吐，并及时就医，告知医生试剂名称及成分，不可自行用药。
4. 试剂泄漏：若试剂发生泄漏，立即用吸水纸吸干泄漏物，并用酒精擦拭污染区域，密封泄漏物后按危险废弃物处理，处理时佩戴手套、口罩等防护用品，避免直接接触泄漏物。
六、补充说明。
本品仅用于科研实验，严禁用于人体、医疗或诊断用途；Cy7.5的近红外荧光特性使其特别适合深层组织成像和活体追踪，与Alexa Fluor 790、DyLight 800、ICG等染料荧光特性相似，可根据实验需求替换使用；不同分子量的CY7.5-Dextran适配不同实验场景，小分子适合细胞内转运研究，大分子适合血管示踪和组织支架成像；活体成像时，可根据实验动物的体重、脏器分布，调整注射剂量和成像时间点，通常在注射后1-6小时为荧光信号很强期；实验过程中可结合透析法、凝胶过滤法等纯化手段，提高标记纯度，减少背景干扰；若需进行多模态成像，可与CT、MRI等技术结合，提升实验研究的全面性。
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