ICG-N3，吲哚菁绿叠氮
ICG-N3是吲哚菁绿（ICG）的叠氮基衍生物，是一种兼具近红外荧光性能与生物正交反应活性的试剂，分子量约为835.0 Da，外观为暗绿色粉末。吲哚菁绿作为临床常用的近红外荧光染料，具有无毒、代谢快、生物相容性好等优势，而叠氮基（-N3）的修饰使其可通过点击化学（Click Chemistry）反应与含炔基的目标分子特异性结合，大幅拓展了其在生物标记领域的应用场景，尤其适用于复杂生物体系中的特异性标记与检测。
理化性质上：ICG-N3继承了ICG优异的近红外光学特性，激发波长约为780 nm，发射波长约为800 nm，在近红外光区域具有强荧光强度和高摩尔消光系数，光穿透力远超可见光，可有效穿透皮肤、肌肉等生物组织，适合活体成像和深层组织检测。其溶解性表现为在DMSO、DMF等有机溶剂中易溶，在水中微溶，配制时需先以有机溶剂溶解制成储备液，再用生理盐水或缓冲液稀释至工作浓度，稀释过程中需缓慢搅拌，避免出现沉淀。此外，ICG-N3的光稳定性略优于未修饰的ICG，在避光条件下可保持稳定的荧光性能，但在强光照射下仍可能发生光漂白，需控制实验中的光照时间和强度。
作用机制：主要分为两部分：一是近红外荧光发射机制，ICG-N3在780 nm左右的激发光照射下，分子内电子发生能级跃迁，跃迁至激发态的电子不稳定，迅速返回基态并释放出800 nm左右的近红外荧光，该荧光信号可被专用检测设备捕获；二是生物正交标记机制，叠氮基与炔基在铜离子催化下发生1,3-偶极环加成反应，形成稳定的三氮唑环，该反应具有特异性强、反应条件温和（常温、生理pH）、副产物少、不干扰生物体内生理过程等特点，可在细胞内、活体组织等复杂环境中实现对目标分子的精准标记。
应用领域：集中在生物医学研究和临床转化研究，在细胞生物学中，可用于标记含炔基的蛋白、多肽、核酸等生物分子，实现细胞内目标分子的定位、追踪及相互作用分析；在活体成像研究中，可标记靶向载体（如纳米颗粒、抗体、多肽），构建近红外荧光探针，用于肿瘤、炎症等病灶的精准定位、边界识别及动态监测，为手术导航提供可视化支持；在药物研发中，可标记药物分子或药物载体，追踪药物在生物体内的分布、代谢及靶向效率，助力靶向药物的研发与优化；此外，还可用于免疫分析、病理切片染色等实验，在临床诊断辅助和基础医学研究中具有重要价值。
使用方法：需结合点击化学反应特性操作，首先配制ICG-N3储备液：取适量暗绿色粉末，加入无水DMSO溶解，配制成1-5 mM的储备液，分装后置于-20℃避光密封保存。标记反应时，将含炔基的目标分子与ICG-N3储备液按一定摩尔比（通常目标分子:染料=1:2-1:5）加入反应体系，加入铜离子催化剂（如CuSO4）和还原剂（如抗坏血酸钠），调节体系pH至7.2-7.6，室温避光孵育2-6小时。反应完成后，通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）纯化产物，去除游离染料和反应杂质。活体成像实验中，将纯化后的荧光探针通过静脉注射、腹腔注射等方式导入动物体内，待探针分布稳定后，用近红外活体成像系统检测荧光信号。
注意事项包括：ICG-N3对光、温度和氧气敏感，储存时需避光、密封、低温，防止氧化和荧光淬灭；
储备液避免反复冻融，建议分装为50 μL或100 μL小体积，使用后立即放回低温环境；
点击化学反应中，铜离子可能对细胞产生毒性，用于细胞内标记时需控制铜离子浓度，或选用无铜点击化学反应体系；
活体实验中，需严格控制探针用量，避免过量导致荧光信号饱和或代谢负担；
实验过程中全程避光，检测设备需选用近红外专用通道，避免与其他荧光信号干扰。
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