FITC-亚油酸是将荧光素(FITC)与亚油酸通过化学偶联形成的化合物,兼具亚油酸的生物学特性和FITC的荧光示踪功能,在脂质代谢、细胞摄取及相关生理过程研究中应用诸多。
FITC(荧光素异硫氰酸酯),一种常用的荧光染料,最大激发波长约 494nm,发射波长约 520nm,发出绿色荧光,具有荧光强度高、易检测的特点,适合荧光显微镜、流式细胞仪等设备分析。
荧光示踪性:FITC的绿色荧光可直观追踪亚油酸在细胞内的转运、分布及代谢路径,如通过荧光成像观察其进入细胞的过程、在细胞器中的定位。
使用注意事项
溶解方法:由于亚油酸的脂溶性,FITC-亚油酸需先用少量有机溶剂(如 DMSO)溶解,再稀释至适宜浓度。
现配现用:FITC 易受强光和氧化影响,溶液需避光保存,且配制后 24 小时内使用完毕,避免荧光淬灭或亚油酸氧化(双键断裂可能影响其代谢活性)。
细胞实验条件优化
浓度选择:过高浓度可能导致非特异性结合或细胞毒性,需通过预实验确定最佳浓度,以荧光信号清晰且细胞活性正常为标准。
避光操作:孵育及后续洗涤、成像过程需避光,避免 FITC 荧光淬灭(尤其避免紫外光直射)。
荧光信号特异性验证
设立对照实验:
空白对照:未处理细胞,排除自发荧光干扰。
竞争对照:用过量未标记亚油酸与 FITC - 亚油酸共同孵育,若荧光信号显著降低,证明 FITC - 亚油酸的摄取是特异性的。
成像与检测注意事项
设备选择:荧光显微镜或共聚焦显微镜需配备 FITC 专用通道(激发 488nm,发射 520-530nm),成像时注意调节曝光时间,避免信号过饱和。
共定位实验:与其他荧光染料(如标记细胞器的红色或蓝色染料)共标时,需确保 FITC 的绿色荧光与其他通道无光谱重叠(如与 Cy3 标记的细胞器共标时,需设置合适的发射滤光片,避免串色)。
储存要求
避光冷冻:FITC 对强光敏感,亚油酸易氧化,需将干燥粉末或浓缩溶液储存在 - 20℃,用棕色瓶或铝箔包裹容器,隔绝空气,避免反复冻融(建议分装为单次用量)。
防潮防氧化:储存环境需干燥,避免高温(室温下易氧化变质,出现颜色加深),解冻后需立即使用,剩余溶液不可再冷冻保存。
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