FITC-Concanavalin A (FITC-ConA),这是一种常用的荧光标记探针,可应用于细胞生物学、糖生物学和免疫分析中。
FITC,是Fluorescein Isothiocyanate (异硫氰酸荧光素) 的缩写。
它是一种常用的荧光染料,在蓝光(~490 nm)激发下会发出明亮的绿色荧光(~520 nm)。
它的异硫氰酸基团 (-N=C=S) 可以与蛋白质(如ConA)上的氨基 (-NH2) 反应,形成稳定的硫脲键,从而将荧光素共价连接到蛋白质上。
科研中怎么用?
定位细胞:活细胞或固定细胞的表面染色,研究细胞膜上特定糖链的表达模式和定位。
定位细胞器:固定且通透化的细胞内染色中,FITC-ConA 常被用作 内质网 (ER) 的标记物。这是因为许多在内质网中加工和折叠的未成熟糖蛋白含有高甘露糖型N-聚糖,正是ConA的结合靶点。
示踪或检测:在利用固定化ConA进行糖蛋白亲和纯化的实验中,FITC-ConA可用于优化结合/洗脱条件或检测纯化效果。
流式细胞术:将FITC-ConA与活细胞或固定(非通透化)细胞孵育,通过流式细胞仪检测细胞表面结合FITC-ConA的荧光强度。
注意事项:
光敏感性:FITC 对光敏感!操作过程中尽量避光(在暗处或弱光下进行孵育、洗涤和保存样品)。
淬灭(Photobleaching):FITC 在强光下荧光会衰减(淬灭)。显微镜观察时使用合适的衰减片,并尽快拍照。
pH依赖性:FITC 的荧光效率受pH影响,在酸性条件下荧光减弱。保持中性或弱碱性缓冲体系。
浓度优化:务必优化浓度和孵育条件,过高浓度会导致非特异性结合和高背景。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)