荧光染料 Cy3-NH2 (Cyanine3 Amine) 的部分问题解答(仅参考)
问:Cy3-NH2的激发和发射波长是多少?
答:
激发波长 (λex): ~548 - 554 nm
发射波长 (λem): ~562 - 570 nm
问:如何溶解 Cy3-NH2?
答:溶剂: 无水二甲基亚砜 (DMSO) 或 无水 N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)。这是最常用的方法,能得到高浓度的储存液。
可以直接用水溶解吗? 建议先溶于 DMSO/DMF 配成高浓度储存液(母液),使用时再稀释到含有一定比例有机溶剂(如 5-10% DMSO/V)的水或缓冲液中。避免直接用纯水配制高浓度溶液。
避免溶剂: 避免使用含有伯胺或仲胺的缓冲液(如 Tris, glycine),它们会与 Cy3-NH2的氨基竞争反应或使其猝灭。
问:标记反应通常在什么条件下进行?
答:
缓冲液:选择无氨基的缓冲液。常用的是:
碳酸氢盐缓冲液: 最常用,利于活化羧基(EDC反应)。
磷酸盐缓冲液: 可用,但注意避免高浓度磷酸盐干扰EDC反应或导致染料沉淀。
pH: 标记反应的最佳 pH 取决于目标分子的反应基团。不同其他反应(如与醛基),pH 要求不同(常为中性)。
温度与时间: 通常在室温 (RT) 或 4℃下反应 1-4 小时至过夜。低温反应更温和,减少非特异性结合;室温反应更快。全程建议避光。
问:标记后需要纯化吗?如何纯化?
答:强烈建议纯化! 未反应的染料会影响实验结果(背景高、假阳性、干扰定量)。
问:如何储存 Cy3-NH2?
答:固体粉末:密封,避光,干燥(最好在干燥器中),-20°C 或更低温度(如 -80°C)冷冻保存。避免反复冻融。
标记后的产物:避光,通常 4℃短期保存,或加入适量甘油(终浓度 50%)后 -20℃冷冻保存(避免反复冻融)。
问:Cy3-NH2稳定吗?
答:固体粉末:在推荐的储存条件下(避光、干燥、低温)相对稳定(通常可达 1-2 年)。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)