CY3.5-Dextran，葡聚糖偶联CY3.5 近红外荧光探针，适配药物递送与细胞示踪）
CY3.5-Dextran（葡聚糖偶联CY3.5）是一种兼具荧光示踪与生物相容性的复合型探针，通过共价键将CY3.5荧光染料与葡聚糖分子稳定连接，既保留了CY3.5的高效荧光特性，又继承了葡聚糖的水溶性、生物可降解性及低细胞毒性，广泛应用于生物医学科研中的细胞示踪、药物递送监测、血管通透性研究及组织成像等场景，尤其适合中深层组织的荧光观察，是科研实验中不可或缺的荧光标记工具。本使用说明详细介绍其使用方法、操作要点、注意事项及应急处理，确保实验操作规范、结果可靠，同时补充适配实验场景的细节优化建议，助力实验效率提升。
一、试剂基本信息。
本品外观根据分子量不同，呈白色、类白色固体或淡黄色溶液，纯度≥95%，荧光发射波长约590-610nm，激发波长约570-580nm，发出明亮的橙红色近红外荧光，荧光量子产率高、光稳定性优良，相较于普通荧光染料，能有效减少光漂白现象，延长荧光监测时间。葡聚糖骨架分子量可按需选择（常见5kDa、10kDa、20kDa等），其中5kDa规格兼具良好的组织渗透性与肾脏清除能力，可避免大分子葡聚糖在体内长期滞留引发的不良反应，适合药物递送系统构建；高分子量规格（50kDa以上）则更适合血管灌注示踪实验。试剂溶解性优良，可快速溶解于去离子水、PBS缓冲液等水相体系，也可溶于二甲基亚砜（DMSO）、二氯甲烷等常规有机溶剂，不溶于非极性有机溶剂。储存条件为-20℃干燥避光密封保存，避免反复冻融，开封后建议1个月内用完，未开封试剂保质期为12个月，储存时需放置于防潮、防光照的试剂柜中，远离热源与氧化剂。
二、实验前准备。
1. 试剂预处理：使用前将试剂从-20℃冰箱取出，放置于室温回温20-30分钟，避免因温度骤变导致试剂结块或荧光性能受损；若为固体试剂，需在无菌、避光条件下精准称量，建议使用分析天平（精度0.1mg），称量后迅速密封剩余试剂，防止吸潮或光照降解。
2. 溶液配制：根据实验需求配制适宜浓度的工作液，常规浓度范围为10-100μg/mL，推荐使用无菌PBS缓冲液（pH7.4）或去离子水配制，若需用于疏水体系实验，可先用少量DMSO溶解后，再用缓冲液稀释至目标浓度，稀释过程中轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡，防止荧光分子变性。配制完成后，可通过0.22μm无菌滤膜过滤，去除杂质与微生物，确保实验体系无菌，过滤后需立即使用，不可长时间放置。
3. 实验器材准备：提前将离心管、移液枪、培养皿、荧光显微镜等实验器材灭菌处理，所有接触试剂的器材需确保无氨基、巯基等活性基团污染，避免与试剂发生非特异性反应；荧光显微镜需提前调试，选择适配CY3.5的激发滤光片（570-580nm）与发射滤光片（590-610nm），预热10-15分钟，确保成像清晰。
三、操作步骤。
（一）细胞示踪实验。1. 细胞培养：将待标记细胞接种于培养皿中，加入适宜的细胞培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中培养至细胞汇合度达到70%-80%，期间定期观察细胞状态，确保细胞活力良好。2. 荧光标记：吸弃旧培养基，用无菌PBS缓冲液轻轻冲洗细胞2-3次，去除残留培养基；加入配制好的CY3.5-Dextran工作液，确保工作液完全覆盖细胞，继续在培养箱中孵育1-4小时，孵育时间可根据细胞类型调整（如巨噬细胞、树突状细胞等吞噬能力较强的细胞，孵育1-2小时即可；普通贴壁细胞可延长至3-4小时），孵育过程中全程避光，可在培养皿外包裹锡箔纸。3. 清洗与固定：孵育结束后，吸弃工作液，用PBS缓冲液冲洗细胞3-4次，每次冲洗后静置1-2分钟，彻底去除未被细胞摄取的游离试剂，避免背景荧光干扰；若需长期保存，可加入4%多聚甲醛固定液，固定15-20分钟，固定后再次用PBS冲洗2次。4. 成像观察：将培养皿置于荧光显微镜下，调节激发光强度与曝光时间，观察细胞内荧光分布情况，记录实验结果，可结合图像分析软件进行荧光强度定量分析。
（二）药物递送监测实验。1. 载体标记：将CY3.5-Dextran与药物载体（如纳米颗粒、脂质体）按适宜比例混合，在室温、避光条件下孵育30-60分钟，使CY3.5-Dextran通过共价作用或非特异性吸附标记到载体表面，标记完成后通过透析或凝胶过滤法纯化，去除未结合的游离试剂。2. 体内/体外递送实验：体外实验可将标记后的药物载体加入细胞培养体系，按上述细胞示踪步骤操作，监测载体的细胞摄取与胞内转运情况；体内实验可将标记后的载体通过尾静脉注射、腹腔注射等方式注入实验动物体内，在不同时间点通过活体荧光成像系统观察载体在体内的分布、靶向性及代谢情况，成像时需设置空白对照组（未注射标记载体的动物），排除背景干扰。
（三）血管通透性研究。
1. 动物预处理：将实验动物（如小鼠、大鼠）麻醉后，固定于手术台上，暴露实验区域血管。
2. 试剂注射：通过尾静脉注射配制好的CY3.5-Dextran工作液（浓度根据动物体重调整，常规为5-10mg/kg），注射速度不宜过快，避免损伤血管。
3. 成像与检测：注射后不同时间点，通过荧光显微镜或活体成像系统观察血管分布、灌注情况及血管通透性变化，若血管通透性增加，CY3.5-Dextran会从血管渗出到周围组织，可通过检测组织中的荧光强度评估通透性变化程度，实验结束后可收集组织样本，进行冰冻切片，进一步观察荧光分布。
四、注意事项。
1. 避光操作：CY3.5荧光分子对光照敏感，全程需在避光条件下进行，包括试剂称量、溶液配制、孵育、清洗及成像等步骤，避免强光直射，可使用锡箔纸包裹容器，实验环境尽量选择暗室或弱光环境，防止荧光分子光漂白，影响实验结果。
2. 浓度控制：工作液浓度需严格按照实验需求配制，浓度过高可能导致细胞毒性增加、荧光淬灭或背景荧光过强；浓度过低则会导致荧光信号微弱，无法准确检测，建议实验前进行预实验，确定工作浓度。
3. 避免污染：实验过程中需严格遵循无菌操作规范，防止试剂污染，若试剂不慎污染，应立即丢弃，不可继续使用；接触试剂的器材需单独使用，避免与其他试剂交叉污染。
4. 储存与处理：剩余试剂需密封后立即放回-20℃冰箱，避免反复冻融（建议分装成小份储存，每次使用一份）；实验结束后，废弃的试剂及耗材需按照生物安全规范处理，不可随意丢弃，含试剂的废液需收集后进行无害化处理，固体废弃物需密封后交由专业机构处理。
5. 干扰因素：实验过程中需避免体系中存在过量的氨基、巯基等活性基团，此类基团可能与CY3.5-Dextran发生非特异性反应，影响标记效果；同时避免使用强酸、强碱缓冲液，防止破坏葡聚糖骨架与荧光染料的连接键，建议使用pH7.0-7.5的缓冲液。
五、应急处理。
1. 皮肤接触：若试剂接触皮肤，立即用大量流动的清水冲洗接触部位15-20分钟，若出现红肿、瘙痒等不适症状，及时就医。2. 眼睛接触：若试剂溅入眼睛，立即用大量生理盐水冲洗眼睛20分钟以上，期间尽量转动眼球，确保眼睛各部位均被冲洗，随后及时就医。3. 误食：若不慎误食，立即催吐，并及时就医，告知医生试剂名称及成分，不可自行服用任何药物。4. 试剂泄漏：若试剂发生泄漏，立即用吸水纸吸干泄漏物，并用酒精擦拭污染区域，密封泄漏物后按危险废弃物处理，处理时佩戴手套、口罩等防护用品，避免接触泄漏物。
六、补充说明。
本品仅用于科研实验，严禁用于人体、医疗或诊断用途；不同分子量的CY3.5-Dextran适用场景不同，实验前需根据具体实验目的选择合适的分子量规格，如细胞内小分子转运研究可选择5kDa规格，血管灌注研究可选择20kDa以上规格；若需进行多色荧光成像，可与FITC、CY5等其他荧光染料配合使用，注意选择激发波长与发射波长不重叠的染料，避免荧光干扰；实验过程中可根据细胞类型、实验环境等因素，适当调整孵育时间、工作液浓度等参数，以获得实验效果；若需长期储存标记后的细胞或组织样本，可置于-80℃冰箱，密封避光保存，避免反复冻融导致荧光信号衰减。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品，不参与保证任何实验，具体应用还需参考相关实验设计及文章！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
