Sulfo-CY3-Alkyne，水溶性Cy3炔基染料
Sulfo-CY3-Alkyne（水溶性Cy3炔基染料）是CY3系列荧光染料的磺化衍生物，在保留CY3优良荧光特性的基础上，通过磺化修饰和炔基功能化，显著提升了水溶性和反应特异性，是一种适用于水相生物体系的高效荧光标记试剂，广泛应用于活细胞成像、生物分子偶联、多通道荧光分析等科研场景，尤其适合对有机溶剂敏感的生物样品标记。其核心优势在于水溶性强、背景干扰低、反应温和，能够在不损伤生物分子活性的前提下，实现特异性荧光标记。
化学结构上，Sulfo-CY3-Alkyne由三个关键部分组成：一是CY3荧光核心骨架，包含共轭多烯链和杂环结构，决定其光学性能，能够发射明亮的橙红色荧光；二是磺酸盐（sulfo）修饰基团，通过在CY3分子上引入磺酰基，显著增强了分子的亲水性，使其能够在水性缓冲液和生物体系中稳定溶解，避免传统疏水性CY3染料的聚集问题；三是炔基（Alkyne，-C≡CH）功能团，作为特异性反应位点，可与叠氮基（-N₃）通过铜催化叠氮-炔环加成反应（CuAAC，即点击化学）形成稳定的三唑环，实现与目标分子的共价连接。这种点击化学反应具有高选择性、高效率、反应条件温和（室温、水相）的特点，无需强酸碱或高温，可很大程度保留生物分子的天然活性。
理化特性方面，Sulfo-CY3-Alkyne的光谱性能与普通CY3基本一致，激发波长约为550nm，发射波长约为570nm，荧光亮度高、光稳定性优良，消光系数高，能够在低浓度下产生明显的荧光信号，检测灵敏度高。与普通CY3相比，其差异在于水溶性，磺化修饰使其无需有机共溶剂即可在水相中均匀溶解，溶解度远高于非磺化CY3，有效降低了染料聚集导致的荧光淬灭，同时减少了在生物体系中的非特异性吸附，降低背景荧光干扰。此外，该试剂化学稳定性好，在中性至弱碱性缓冲液中（pH 7.0-8.5）能够保持稳定的荧光性能和反应活性，对生物样品毒性低，适合活细胞长期培养和成像。
制备过程主要包括三步：首先合成CY3荧光母核，通过杂环缩合反应构建共轭多烯结构；其次进行磺化修饰，在CY3分子的特定位点引入磺酰基，提升水溶性；最后引入炔基功能团，通过化学偶联将炔基连接到CY3磺化衍生物上，生成Sulfo-CY3-Alkyne。合成过程中需严格控制磺化程度和炔基引入效率，避免过度磺化影响荧光性能，产物经透析、凝胶过滤层析等方法纯化后，纯度可达95%以上，确保标记实验的可靠性。使用时，可直接将试剂加入水相反应体系，无需有机助溶，点击反应中可加入铜催化剂（如CuSO₄）和还原剂（如抗坏血酸钠），促进炔基与叠氮基的反应，反应时间通常为1-4小时，室温避光进行即可。
应用领域聚焦于水相生物体系和特异性偶联：在活细胞成像中，可用于标记叠氮修饰的蛋白质、核酸、脂质等生物分子，追踪其在细胞内的分布、转运和相互作用，无需有机溶剂，避免损伤细胞；在生物分子偶联中，可用于抗体、多肽、多糖等分子的荧光修饰，实现分子靶向示踪、免疫分析等研究；在核酸标记中，可与叠氮化DNA、RNA反应，用于基因定位、核酸杂交、miRNA示踪等实验；在多通道荧光成像中，其橙红色荧光可与其他荧光染料（如GFP、Cy5）的荧光信号区分，实现多分子同时示踪；此外，还可用于纳米材料表面功能化、生物传感器制备、药物递送系统示踪等领域。保存时需在-20℃、避光、干燥环境下密封保存，避免潮湿和光照导致试剂降解，水相母液可在4℃避光保存1-3天。
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