CAS:170908-81-3 DOTA-NHS酯螯合配体产品特性与使用指南
DOTA-NHS酯（CAS:170908-81-3），中文全称为1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸1-(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)酯，是一种兼具高效金属螯合能力与生物偶联活性的功能性螯合配体，核心应用于放射性示踪、金属标记、生物探针构建及靶向药物研发领域。该产品结合了DOTA大环的强螯合特性与NHS酯的高偶联活性，性能优异且使用便捷，以下详细介绍其产品特性与使用指南。
一、核心产品特性。
1. 螯合特性：以1,4,7,10-四氮环十二烷（DOTA）为核心骨架，含有四个氮原子和四个乙酸基团，可形成八配位稳定螯合结构，对多种金属离子（Gd³⁺、Lu³⁺、Cu²⁺、Ga³⁺、In³⁺等）具有高亲和力，解离常数（Kd）可达10-15-10-20 mol/L，螯合后形成的复合物在生理环境中稳定，不易发生金属离子解离，可有效避免金属毒性。
2. 偶联特性：分子末端修饰NHS酯（N-羟基琥珀酰亚胺酯）官能团，可在温和条件下与蛋白质、抗体、多肽等生物分子中的初级氨基（-NH2）发生亲核加成反应，生成稳定的酰胺键，偶联效率≥95%，反应过程中不破坏生物分子的天然构象与生物活性。NHS酯基团与氨基的反应特异性高，无明显副反应，可实现精准偶联。
3. 理化特性：外观为白色或类白色粉末，纯度≥95%（HPLC检测），分子式为C19H28N4O10，分子量为472.45。溶解性良好，易溶于DMSO、DMF等有机溶剂，微溶于水，可在水性缓冲体系（pH7.5-9.0）中稳定存在，适配生物偶联实验需求。化学稳定性高，在常温、避光条件下不易水解，储存过程中性能稳定，无明显降解。
4. 功能特性：偶联后的产物可同时保留DOTA的螯合功能与目标生物分子的活性，既能螯合放射性金属同位素（如¹⁶⁸Ga、¹⁷⁷Lu、⁶⁴Cu）用于PET/SPECT成像，也能螯合顺磁性金属离子（如Gd³⁺）用于MRI成像，还可用于金属离子检测、催化反应等领域，功能多样且适配性强。
二、详细使用指南。
1. 试剂准备：将DOTA-NHS酯粉末分装至无菌离心管中，每管分装量根据实验需求确定（建议单次使用量，避免反复冻融）；配制偶联缓冲液：推荐使用pH7.5-8.5的PBS缓冲液或碳酸氢钠缓冲液，确保缓冲液中不含氨基（如Tris缓冲液不可用），防止干扰偶联反应；目标生物分子（蛋白质、抗体等）需提前纯化，浓度调整为1-10mg/mL。
2. 偶联反应步骤：向目标生物分子溶液中加入DOTA-NHS酯，摩尔比推荐为生物分子: DOTA-NHS酯=1:5-1:10（可根据偶联效率需求调整）；室温下避光搅拌反应1-2小时，或4℃避光反应4-6小时，确保反应充分；反应过程中可轻轻震荡离心管，促进试剂溶解与反应进行。
3. 产物纯化：反应完成后，采用透析法（透析袋截留分子量根据生物分子大小选择）、凝胶过滤色谱（Sephadex G-25）或HPLC法纯化产物，去除未反应的DOTA-NHS酯及副产物（N-羟基琥珀酰亚胺）；纯化后检测产物纯度（HPLC法）与偶联效率，偶联效率≥85%即可用于后续实验。
4. 金属螯合步骤：将纯化后的偶联产物溶于适当缓冲液（pH5.0-6.0），加入金属离子溶液（摩尔比1:1.2），37℃避光孵育30-60分钟，完成螯合反应；螯合后可通过超滤法去除未螯合的游离金属离子，检测螯合效率，确保螯合完全。
5. 注意事项：操作过程中全程避光，防止NHS酯水解与产物降解；避免接触强酸、强碱，防止破坏DOTA螯合骨架与NHS酯活性；储存与使用时严格遵循无菌操作，避免污染；未使用完的试剂需立即密封，-20℃避光干燥保存；该产品仅供科研使用，不可用于临床诊断或人体试验。
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