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FITC-Celastrol,异硫氰酸荧光素标记雷公藤红素的核心应用

时间:2026-01-28    阅读:27    点赞:0

异硫氰酸荧光素标记雷公藤红素(FITC-Celastrol)

异硫氰酸荧光素标记雷公藤红素(FITC-Celastrol)是由异硫氰酸荧光素(FITC)与天然三萜类化合物雷公藤红素通过共价偶联制成的功能性荧光探针,纯度≥95%,可提供固体粉末、冷冻干燥品或溶液形式,兼具雷公藤红素的生物活性与FITC的荧光追踪能力,是药物动力学、分子靶点验证、细胞生物学研究的重要工具。雷公藤红素(Celastrol)是从传统中药雷公藤的根皮中提取的天然活性成分,属于五环三萜类化合物,具有免疫抑制等多种药理活性,其作用机制复杂,可调控多种信号通路(如NF-κB、MAPK、AKT等),在自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的治疗研究中具有广阔前景。但由于雷公藤红素的脂溶性强、水溶性差,且体内分布与作用靶点难以追踪,限制了其作用机制的深入研究,FITC标记技术的应用有效破解了这一难题。FITC作为常用的绿色荧光染料,激发波长约495nm,发射波长约520nm,荧光信号明亮、稳定性好、易于检测,且其分子上的异硫氰酸基团(-NCS)可与雷公藤红素分子中的羟基、氨基形成稳定的硫脲键,标记后不破坏雷公藤红素的核心结构与药理活性,为其体内外动态追踪提供了可能。


该材料的制备:

需经过活化、偶联、纯化三个核心步骤,首先将FITC溶解于无水二甲基亚砜(DMSO)中,制备成浓度为10-20mg/mL的活化溶液,避光静置30分钟,确保FITC充分溶解与活化;随后将雷公藤红素溶解于无水乙醇或DMSO中,加入适量的三乙胺作为催化剂,调节反应体系pH值至8.0-9.0,缓慢滴加FITC活化溶液,雷公藤红素与FITC的摩尔比控制在1:1.2-1:1.5,室温下避光搅拌反应2-6小时,通过薄层色谱(TLC)监测反应进程,当原料点消失时表明反应完成。反应结束后,采用柱层析法(硅胶柱,洗脱剂为氯仿-甲醇混合溶液)纯化产物,收集目标组分,经旋转蒸发去除溶剂,冷冻干燥后得到固体产品;若制备溶液型产品,可将纯化后的产物溶解于DMSO或PBS缓冲液中,过滤除菌后分装保存。纯化后的产物需通过紫外-可见分光光度计与荧光分光光度计验证纯度与荧光活性,在280nm(雷公藤红素特征峰)、495nm(FITC特征峰)处均出现明显吸收峰,且激发后能发出稳定的绿色荧光,表明标记成功。


储存条件:

储存条件对该材料的性能影响较大,固体粉末需密封置于-20℃避光环境,加入干燥剂防止吸潮,避免反复冻融(建议分装为1mg、5mg规格,单次使用单份样品),有效期约8-10个月;溶液型产品需在-80℃避光保存,保存时间不超过3个月,且需避免与空气接触,防止氧化变质。使用时需根据实验需求选择适宜的溶解介质与工作浓度,脂溶性实验可选用DMSO、乙醇作为溶剂,水溶性实验可选用含少量DMSO的PBS缓冲液(pH7.4),DMSO含量不超过5%,避免影响细胞活性;工作浓度需精准调控,细胞实验中孵育浓度通常为0.1-1μM,过高浓度易产生非特异性荧光信号,且可能对细胞造成毒性,过低浓度则荧光信号微弱,难以检测;动物实验中给药浓度可根据实验模型调整,通常为1-5mg/kg,采用腹腔注射或静脉注射方式给药。


FITC-Celastrol的核心应用:

主要集中在药物机制研究与纳米药物开发领域:

在药物动力学研究中,可通过荧光信号实时追踪雷公藤红素在体内的吸收、分布、代谢、排泄过程,借助小动物活体成像系统观察其在肝脏、肾脏、肿瘤等组织器官中的富集情况,分析其体内代谢路径与半衰期,为优化给药方案、提高生物利用度提供数据支撑;

在分子靶点验证中,可通过荧光共聚焦显微镜观察FITC-Celastrol在细胞内的亚细胞定位,分析其与线粒体、内质网、细胞核等细胞器的相互作用,结合免疫荧光染色技术,验证其与目标蛋白(如NF-κB p65)的结合情况,明确其作用靶点与信号通路;在细胞生物学实验中,可用于研究雷公藤红素对细胞增殖、凋亡、迁移的影响,通过荧光显微镜观察细胞内荧光信号的变化,分析药物的胞内摄取效率与作用机制;

在纳米药物开发中,可将FITC-Celastrol负载于脂质体、纳米粒、胶束等载体中,构建可视化纳米递送系统,实时监测载体的胞内摄取与药物释放过程,优化载体结构,提高靶向治疗效果。


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使用过程中需注意以下事项

一是操作全程避光,从溶解、孵育到成像的各个环节,均需在避光环境下进行,避免强光照射导致荧光淬灭,影响实验结果;

二是工作液需现配现用,配置完成后若需短期保存,可置于4℃避光环境,保存时间不超过8小时;

三是避免与重金属离子、强氧化剂、高浓度酸碱性溶液接触,此类物质会破坏FITC的荧光结构与雷公藤红素的活性;

四是细胞实验中需严格无菌操作,孵育结束后用PBS缓冲液冲洗细胞3-4次,去除未结合的探针,减少非特异性荧光干扰;

五是雷公藤红素本身具有一定毒性,操作时需佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品,避免皮肤接触、吸入与误食,实验废弃物需按危险化学品规范处理;六是该材料仅限科研使用,不可用于人体实验或临床诊疗。

以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品,不参与保证任何实验,具体应用还需参考相关实验设计及文章!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)   


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