Cy7标记长春瑞滨(酒石酸盐)(Cy7-Vinorelbine-tartrate)是一款针对药物研究的高端荧光标记单品,由近红外染料Cy7与化疗药物长春瑞滨酒石酸盐通过精准共价偶联制成,兼具长春瑞滨的活性与Cy7的优异近红外成像能力,纯度≥98%,外观为深蓝色固体粉末,在肿瘤治疗机制研究、靶向递送系统开发、术中精准成像导航等领域具有不可替代的价值,是目前生物医药研究领域的高端核心工具材料。
长春瑞滨酒石酸盐(Vinorelbine-tartrate)是一种半合成的长春花生物碱类化疗药物,通过抑制肿瘤细胞的微管蛋白聚合,阻断细胞有丝分裂进程,从而发挥作用,对非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤等多种恶性肿瘤具有显著疗效,在临床上应用广泛。但由于其对正常细胞也存在一定毒性,易产生骨髓抑制、神经毒性等副作用,且体内分布缺乏特异性,限制了其临床应用效果,而Cy7标记技术的应用,为长春瑞滨的精准递送与动态追踪提供了可能,助力解决其临床应用痛点。
Cy7作为一款性能优异的近红外荧光染料,是该单品的核心光学组件,其激发波长约750nm,发射波长约770nm,相较于可见光区与短近红外区染料,具有更强的组织穿透能力(可穿透10cm以上生物组织)、更低的背景荧光干扰(生物体内血红蛋白、水对该波长光的吸收与散射弱)、更高的荧光稳定性及更低的光毒性,能够在活体动物模型中实现深层组织的精准成像与长时间动态追踪,完美适配肿瘤体内研究的需求。该单品的偶联工艺经过多轮优化,采用活化酯法实现Cy7与长春瑞滨酒石酸盐的稳定共价结合,优先选择长春瑞滨分子中的氨基作为结合位点,选用Cy7-NHS酯作为活化染料,通过酰胺化反应形成稳定的酰胺键,偶联过程中严格控制反应条件,避免长春瑞滨的药理活性受影响。具体工艺参数如下:反应体系选用无水DMF作为溶剂,加入适量三乙胺调节pH值至8.0-8.5,长春瑞滨酒石酸盐与Cy7-NHS酯的摩尔比控制在1:1.1-1:1.3,反应温度维持在25℃,避光搅拌反应4-6小时,通过HPLC实时监测反应进程,确保反应完全。反应结束后,采用多重纯化工艺去除游离Cy7与反应杂质,首先通过凝胶过滤层析(Sephadex G-15)初步分离,再经反相高效液相色谱(RP-HPLC)精制,收集目标组分,经旋转蒸发浓缩、冷冻干燥得到固体产品,纯化后的产物纯度可达98%以上,通过紫外-可见分光光度计与荧光分光光度计验证,在267nm(长春瑞滨特征峰)与750nm(Cy7特征峰)处均出现明显吸收峰,激发后能发出稳定的近红外荧光,且长春瑞滨的活性保留率≥90%,确保单品兼具成像功能与药理活性。
该单品的储存与使用条件具有严格要求,以保障其性能稳定性。储存方面,固体粉末需密封置于-20℃避光环境,加入干燥剂防止吸潮,同时采用铝箔袋真空包装,隔绝空气与水分,避免氧化变质;建议分装为1mg、5mg规格,单次使用单份样品,避免反复冻融(冻融次数不超过2次),否则会导致荧光淬灭与长春瑞滨活性衰减,有效期约12个月。运输过程中需采用冷链运输(4℃避光),运输时间不超过72小时,配备保温与避光包装,防止温度波动与强光照射影响产品性能。使用方面,需根据实验场景选择适宜的溶解介质与工作浓度:体外细胞实验可选用含少量DMSO的无血清培养基(DMSO含量≤5%)或PBS缓冲液(pH7.4)溶解,超声辅助溶解后离心(5000r/min,10分钟)去除不溶物,工作浓度控制在0.1-1μM,孵育时间根据细胞类型调整(通常为2-4小时),孵育结束后用PBS缓冲液冲洗细胞3-4次,去除未结合的单品,减少非特异性荧光干扰;体内动物实验可选用无菌生理盐水或含5%葡萄糖的生理盐水溶解,工作浓度为1-5mg/kg,采用静脉注射方式给药,给药后可通过小动物活体成像系统实时监测药物在体内的分布与代谢情况,成像时间点可根据实验需求设置(从给药后1小时至72小时)。

在应用场景中,Cy7标记长春瑞滨(酒石酸盐)的核心优势得到充分发挥,覆盖肿瘤研究的多个环节。在肿瘤治疗机制研究中,可通过Cy7的近红外荧光信号,实时追踪长春瑞滨在肿瘤细胞内的摄取过程、亚细胞定位(主要定位于细胞核周围的微管),分析其对微管蛋白聚合的抑制效果,借助荧光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂的阻断情况,明确其作用的分子机制;同时可用于研究肿瘤细胞对长春瑞滨的耐药机制,分析耐药细胞与敏感细胞对药物的摄取效率、代谢速度差异,为开发逆转耐药性的药物提供参考。在靶向递送系统开发中,可将该单品负载于脂质体、纳米粒、胶束、树枝状大分子等纳米载体中,构建“成像-治疗”一体化纳米平台,借助Cy7的荧光信号实时监测载体的胞内摄取、靶向富集效果、药物释放过程,优化载体的粒径、表面修饰、负载量等参数,提高药物的肿瘤靶向性,减少对正常组织的毒性;例如,在脂质体载体研究中,可通过荧光成像观察脂质体在肿瘤组织的富集情况,评估EPR效应(高通透性和滞留效应)的发挥效果,为载体结构优化提供数据支撑。在临床前术中成像导航研究中,可用于肿瘤边界的精准识别与转移灶的检测,借助Cy7的深层组织穿透能力,在活体动物模型中清晰显示肿瘤组织与正常组织的边界,以及微小转移灶的位置,为肿瘤切除手术提供精准导航,提高手术切除率,减少肿瘤复发风险;此外,还可用于评估化疗药物的联合治疗效果,通过荧光信号监测长春瑞滨与其他化疗药物、免疫药物的协同作用,优化联合给药方案。
使用该单品时需注意多项关键事项:一是操作全程严格避光,包括溶解、孵育、成像、储存等所有环节,避免强光照射导致Cy7荧光淬灭,影响成像效果与实验数据准确性;二是工作液需现配现用,配置完成后若需短期保存,可置于4℃避光环境,保存时间不超过12小时,超过时间后需重新配置;三是避免与强氧化剂、重金属离子、高浓度酸碱性溶液接触,此类物质会破坏Cy7的荧光结构与长春瑞滨的药理活性;四是长春瑞滨具有较强的细胞毒性,操作时需佩戴手套、口罩、护目镜等全套防护用品,避免皮肤接触、吸入与误食,实验台面需铺防护垫,实验废弃物需按危险化学品规范处理,避免环境污染;五是该单品仅限科研使用,不可用于人体临床诊疗与动物临床治疗,动物实验需严格遵循动物伦理规范,控制给药剂量与实验周期;六是使用前需仔细核对产品检测报告,确认纯度、荧光活性、药理活性等参数达标后再进行实验,若出现荧光信号微弱、药物活性异常等情况,需及时排查储存与操作环节的问题。
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