Sulfo-Cy3-DBCO，水溶性花菁染料CY3标记二苯并环辛炔
Sulfo-Cy3-DBCO是一种水溶性近红外荧光染料衍生物，由磺化花菁染料Cy3、二苯并环辛炔（DBCO）基团通过共价结合形成，分子量约为836.9 Da，外观为粉红色至红色粉末，兼具磺化Cy3的水溶性、荧光性能与DBCO的无铜点击化学活性，是一种适用于水性体系、活细胞、活体组织的特异性荧光标记试剂。相较于普通Cy3-DBCO，磺化修饰后的试剂水溶性大幅提升，无需有机溶剂辅助溶解，生物相容性更优，可有效减少对生物体系的毒性干扰。
理化性质上：Sulfo-Cy3-DBCO的光学性能优异，激发波长约为550 nm，发射波长约为570 nm，处于可见光红色区域，荧光强度高，摩尔消光系数大，荧光量子产率高，可通过常规荧光检测设备（荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计）精准检测。水溶性方面，由于分子结构中引入了磺酸盐基团（-SO₃⁻），该试剂在水中具有很佳的溶解性，可直接用生理盐水、PBS缓冲液等水性溶剂配制工作液，溶解度可达10 mg/mL以上，避免了有机溶剂对活细胞、活体组织的损伤。光稳定性方面，Sulfo-Cy3-DBCO具有良好的抗光漂白能力，在常规激发光强度下，可保持稳定的荧光信号，适合长时间动态观测。此外，该试剂在生理pH范围（6.5-8.0）内性能稳定，不会发生荧光淬灭或结构降解，且无明显细胞毒性，生物相容性优异。
作用机制：基于无铜点击化学（IEDDA反应）和荧光示踪原理：DBCO基团作为亲双烯体，可与含叠氮基（-N3）的目标分子发生高度特异性的逆电子需求狄尔斯-阿尔德反应，该反应无需金属催化剂，反应速率快，条件温和（常温、生理pH），副产物无毒性，可在活细胞内、活体组织等复杂生物体系中高效进行，形成稳定的共价键；磺化Cy3基团作为荧光报告基团，在550 nm激发光照射下，释放出570 nm的红色荧光信号，通过检测设备捕获信号，实现对目标分子的定位、追踪及定量分析。磺化基团的引入不仅提升了水溶性，还增强了试剂的生物相容性，扩大了其在水性体系中的应用范围。
应用领域广泛：
涵盖活细胞标记、活体成像、免疫分析、药物研发、生物传感器构建等方向。在活细胞研究中，可用于标记含叠氮基的蛋白、核酸、多肽、脂质等生物分子，实现细胞内目标分子的动态追踪、相互作用分析，以及细胞增殖、凋亡、迁移的实时观测，由于无需铜离子催化，可避免对细胞的毒性损伤；在活体成像中，可标记靶向载体（如抗体、多肽、纳米颗粒）构建荧光探针，用于肿瘤、炎症、心血管疾病等病灶的精准定位、边界识别及手术导航，水溶性优势使其在体内代谢更温和，毒性更低；在免疫分析中，可标记抗体构建荧光免疫探针，用于抗原的特异性检测、免疫组织化学染色、流式细胞术分析等，提升检测的特异性和灵敏度；在药物研发中，可标记药物分子或载体，追踪药物在生物体内的吸收、分布、代谢、排泄过程，评估靶向药物的递送效率和疗效；此外，还可用于生物传感器构建，通过点击反应将荧光探针固定在传感器表面，实现对目标分析物的高特异性、高灵敏度检测。
使用方法：
简单便捷，无需复杂预处理，首先配制储备液：取适量Sulfo-Cy3-DBCO粉末，加入无菌PBS缓冲液（pH 7.4）溶解，配制成1-5 mM的储备液，分装为小体积（如50 μL、100 μL），置于-20℃避光密封保存，避免反复冻融。活细胞标记实验中，将储备液用细胞培养液稀释至工作浓度（通常为0.5-5 μM），加入到细胞培养体系中，37℃、5% CO₂培养箱中孵育30-90分钟，孵育结束后用PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，去除游离的荧光探针，再通过荧光显微镜观察细胞内荧光分布，或用流式细胞仪定量分析荧光强度。活体成像实验中，将配制好的工作液通过静脉注射、腹腔注射等方式导入动物体内，根据探针代谢特性，在注射后不同时间点用活体荧光成像系统检测荧光信号，分析目标分子在体内的分布情况。免疫分析实验中，将Sulfo-Cy3-DBCO与含叠氮基的抗体按比例孵育，反应完成后纯化，得到荧光标记抗体，再用于抗原检测。
注意事项：
Sulfo-Cy3-DBCO对光敏感，储存时需避光、低温（-20℃），长期保存可置于-80℃，防止荧光淬灭和结构降解；储备液避免反复冻融，使用前需室温复温并轻柔混匀，确保溶液均匀；实验过程中全程避光，细胞孵育、洗涤、检测等步骤均需在避光条件下进行，可使用避光耗材；反应体系中避免存在强氧化剂、还原剂，以免破坏DBCO基团或Cy3结构，影响反应效率和荧光性能；活细胞标记时，需控制工作液浓度，过高浓度可能导致非特异性结合，影响实验准确性；活体实验中，需根据动物体重优化探针用量，确保荧光信号清晰且无明显毒性；检测时需选用红色荧光通道，避免与其他荧光信号交叉干扰，同时可加入抗淬灭剂延长荧光信号寿命。
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