5-BDBD是一种特异性的P2X7受体拮抗剂，可通过阻断P2X7受体的激活，发挥抗炎、*肿瘤等生物活性。将FITC与5-BDBD偶联，可利用FITC的荧光示踪特性，直观观察5-BDBD与P2X7受体的结合过程及分布情况。本研究旨在制备FITC-5-BDBD探针，探究其荧光示踪特性，并验证其对P2X7受体的靶向结合活性。
基本信息：
基础信息 |
详情 |
产品名称 |
FITC-5-BDBD（异硫氰酸荧光素-5-BDBD） |
荧光标记物 |
异硫氰酸荧光素（FITC），发射波长约525nm |
核心研究方向 |
荧光示踪特性、P2X7受体靶向结合活性验证 |
靶向受体 |
P2X7受体（嘌呤能受体，参与炎症、免疫调节及肿瘤进展） |
核心验证方法 |
荧光滴定实验、表面等离子体共振（SPR）、细胞结合实验 |
异硫氰酸荧光素-5-BDBD，FITC-5-BDBD的荧光示踪特性及 P2X7 受体靶向结合活性验证
首先通过异硫氰酸酯与氨基的反应制备FITC-5-BDBD探针，经柱层析纯化后，对其荧光特性进行检测。结果显示，该探针在PBS缓冲液中激发波长为495nm，发射波长为525nm，荧光量子产率为0.72，且在pH 6.0-8.0的生理范围内具有良好的荧光稳定性，孵育24h后荧光强度变化小于10%，适合用于生物体系中的荧光示踪。
在P2X7受体靶向结合活性验证中，首先通过荧光滴定实验检测FITC-5-BDBD与重组P2X7受体的结合能力。随着探针浓度的增加，重组P2X7受体溶液的荧光强度逐渐增强，且呈现良好的浓度依赖性，计算得出其结合常数（Ka）为2.3×10^5 L/mol，表明两者具有较强的结合能力。
表面等离子体共振（SPR）实验进一步证实，FITC-5-BDBD可特异性结合P2X7受体，解离常数（Kd）为4.5μmol/L。细胞结合实验中，将FITC-5-BDBD与P2X7受体高表达的巨噬细胞共孵育后，激光共聚焦显微镜观察显示，细胞表面出现明显的绿色荧光信号，而在P2X7受体敲低的细胞中，荧光信号显著减弱，表明该探针可特异性结合细胞表面的P2X7受体。本研究成功制备了具有良好荧光示踪特性的FITC-5-BDBD探针，其对P2X7受体的高特异性靶向结合活性为后续研究P2X7受体的功能及5-BDBD的作用机制提供了重要工具。
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