本文介绍 CY5.5-Dextran（Cy5.5 标记葡聚糖） 的实用使用方法介绍，为便于快速应用，提供常用条件与可调范围，实验中请根据具体体系做优化。
CY5.5-Dextran
基本说明与分子量选择：Cy5.5 为近红外染料（激发/发射峰大致在 ~670–680 nm / ~690–710 nm），用作荧光示踪时背景低、组织穿透较好。Dextran 有多种分子量（例如 4 kDa、10 kDa、40 kDa、70 kDa、500 kDa 等），分子量决定血液滞留、组织渗透与胞吞途径：低分子量（≤10 kDa）易迅速滤过肾脏，高分子量（≥70 kDa）更适用于血管示踪与血管通透性研究；细胞吞噬/内吞研究常用 10–70 kDa。选择前先确定用途。
储存与配制：试剂通常提供冻干粉或溶液。冻干品避光干燥 −20°C 保存，溶液分装后 −20°C（短期 4°C）避光保存，避免反复冻融。配制时常用无菌去离子水或 PBS（pH 7.4）溶解，推荐配制 母液 1–10 mg/mL（视分子量与用途），用 0.22 µm 滤器无菌过滤（若为纳米/大分子注意滤芯回收损失），分装避光保存。尽量在无光下操作并用遮光管或铝箔包裹。
细胞（体外）成像与内吞实验：
终浓度范围参考：0.01–1 mg/mL（10–1000 µg/mL）。用于常见内吞/胞吞动力学的起始浓度常设 50–200 µg/mL。
孵育时间：短时（5–30 分钟）观察快速摄取与膜结合，长期（1–24 小时）观察内体/溶酶体分布与降解。
温度对照：37°C（允许内吞）与 4°C（抑制内吞）可作区分胞吞/结合的对照。
洗涤：孵育后用 PBS 洗涤 3 次以去除未结合分子，必要时用酸性洗脱（如 0.1 M 酸性盐溶液）去除表面吸附的分子再中和。
固定与染色：用 4% 多聚甲醛（室温，10–15 min）固定后可进行共染（例如 DAPI、抗体染色）；注意某些封片剂可能含有淬灭剂，选择兼容近红外的封片剂。
显微镜设置：激发光源建议使用 633–670 nm 激发（或 640/670 nm 激光），发射检测通道约 680–750 nm（根据显微镜滤片/探测器微调）。采图时避免过度激发以减缓光漂白。
流式细胞术（FACS）：
建议终浓度范围 1–100 µg/mL 做细胞标记（时间 10–30 min，4°C 避免内吞以检测表面结合），使用 PBS + 1% BSA 缓冲并充分洗涤两次。
仪器通道：使用远红 / Cy5.5 相应通道（例如 640 nm 激光 + 710/50 nm 滤镜，具体按仪器配置）。
设置补偿与阴性对照（未染细胞、染料仅对照）以校正自发荧光与补偿。
体内给药与成像（小动物）：
剂量：常用范围 0.5–10 mg/kg（依据分子量与实验目的调整）。用于血管通透性/淋巴示踪常用 2–5 mg/kg 起始；对于长效血管示踪可选较高分子量并适当增加剂量。
给药途径：静脉注射（尾静脉）常用于血管与全身分布；皮下注射/肌肉注射用于淋巴示踪或局部给药。
成像时间窗：近红外成像可在给药后即时及多时点（数分钟至数小时、乃至天）进行随访；低分子量在短时间内清除，需短时多点采集。
注意：在体内使用前确认无热毒性，保留对照组并遵守动物伦理。
纯化、去除内毒素与质量控制：
若用于体内实验或敏感细胞，应进行内毒素（endotoxin）检测与去除（柱层析或专用试剂），并检测游离染料含量以免高背景。
可用凝胶过滤（如 Sephadex G-25）、离心过滤（Amicon）或透析去除游离染料。
测定染料：Dextran-Cy5.5 的标记度可通过吸光度测定（使用 Cy5.5 的吸收峰）与 dextran 含量估算，必要时使用 UV-Vis 或荧光光谱仪确认。
兼容性与多色成像：
Cy5.5 属近红外通道，易与 GFP/YFP 等绿色通道与红色（TRITC）等常见通道差异化。做多色实验时注意光谱重叠与补偿设置。
避免与强淬灭剂或含有高吸光性的化学试剂共用；某些封片剂或试剂可能降低远红荧光信号。
安全与操作注意事项：
操作时避光、戴手套与护目镜，废弃物按化学/生物危害处理。
存储避光低温，分装使用以减少冻融与光漂白。
在报告/发表中注明 dextran 分子量、染料规格、最终浓度、孵育时间与洗涤条件，便于他人重复。
最后提示：以上条件为常用起点，具体体系（细胞类型、动物模型、荧光显微镜/流式配置）差异较大，建议先做小规模梯度实验（染料浓度、孵育时间、分子量）以确定最佳参数。如需，我可以帮您写一份按您目标（例如“活细胞内吞动力学测定”或“体内血管通透性成像”）量身定制的详细实验流程。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
