CY5-胆固醇（CY5-Cholesterol）具有显著的荧光性质，这是由其分子中的 CY5 染料基团决定的。以下是关键特性详解：
荧光特性核心参数
特性 数值/描述
激发波长（Ex） 峰值 ≈ 640-650 nm（需使用640 nm激光器激发）
发射波长（Em） 峰值 ≈ 660-670 nm（深红色至近红外区）
斯托克斯位移 ~20-30 nm（有效区分激发与发射信号，降低背景干扰）
荧光亮度 中等（量子产率 ≈0.1-0.3），优于自发荧光但弱于高量子产率染料（如Alexa Fluor 647）
光稳定性 较稳定，但长时间光照仍会淬灭（需避光操作+抗淬灭封片剂）
关键优势：
近红外发射（650-900 nm）可穿透深层生物组织，避开血红蛋白、脂质等生物分子的自发荧光干扰（常见于紫外-可见光区），显著提升活体成像信噪比。
荧光功能的实验验证
1. 光谱验证（必做！）
方法：使用荧光分光光度计测量 CY5-胆固醇溶液（溶于甲醇/PBS）的激发/发射光谱。
预期结果：在640 nm激发下，出现660-670 nm的发射峰（下图示意）。
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A[640 nm激光] --> B[CY5-胆固醇] --> C[发射660-670 nm荧光]
2. 细胞膜定位验证
步骤：
将细胞与1-5 μM CY5-胆固醇孵育（37°C, 15-30 min）；
洗涤后共聚焦显微镜观察（640 nm激发，660-700 nm收集）。
预期现象：荧光特异性分布于细胞膜（脂筏区域），与膜染料（如DiD）共定位。
3. 淬灭与干扰排除实验
对照组 目的
游离CY5染料 排除染料非特异性黏附
过量未标记胆固醇 验证定位特异性（竞争后荧光应减弱）
4°C孵育组 确认能量依赖性内吞过程（低温抑制内吞）
荧光性质的应用价值
1. 细胞层面
胆固醇运输追踪：实时观察胆固醇从质膜→内体→溶酶体的动态过程（需联合溶酶体探针）。
脂筏微域可视化：结合FRAP（荧光漂白恢复）技术定量脂质流动性。
2. 活体成像
肿瘤代谢研究：静脉注射CY5-胆固醇后24 h，近红外成像显示肿瘤部位高摄取（富集于增殖细胞膜）。
动脉粥样硬化斑块：靶向巨噬细胞泡沫细胞的胆固醇沉积（主动脉斑块荧光信号↑）。
注意事项（可能影响荧光表现！）
浓度依赖性淬灭：
高浓度（>10 μM）时，探针易聚集导致荧光自淬灭（信号反而减弱）。
解决：优化浓度（1-5 μM），超声处理或使用载体（如甲基-β-环糊精）分散。
环境敏感性：
荧光强度受pH影响（酸性溶酶体中部分淬灭），定位时需校正。
生物活性干扰：
CY5标记可能略微改变胆固醇亲脂性，建议通过胆固醇外流实验验证功能完整性。
与其他胆固醇探针对比
探针 激发/发射波长 穿透深度 适用场景
CY5-胆固醇 640/670 nm ★★★★★ 活体成像、深组织追踪
NBD-胆固醇 460/534 nm ★★☆ 细胞膜快速标记（体外）
DHE 紫外激发 ★☆☆ 天然类似物，但灵敏度低
注：DHE（脱氢胆固醇）是天然荧光胆固醇，但需紫外激发且量子产率低。
总结
CY5-胆固醇具有明确且实用的荧光性质：
✅ 近红外发射（660-670 nm）适合深层组织成像；
✅ 脂溶性结构保证其整合到细胞膜；
✅ 可通过光谱和共聚焦成像直接验证。
使用要点：
严格控制浓度避免自淬灭；
必设游离染料组与竞争对照组；
活体成像时选择注射后6-48 h最佳时间窗。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
