CY5(Cyanine 5)染料,无论它标记的是谷氨酸还是其他分子(如蛋白质、抗体、核酸等),其核心的光谱特性(激发和发射波长)基本保持不变。
标记物(如谷氨酸)主要影响的是染料的水溶性、细胞穿透性、靶向特异性以及在某些环境下的荧光量子产率,但不会改变其吸收和发射光谱的最大峰值。
因此,CY5-谷氨酸的激发和发射波长与标准CY5染料是一致的:
* 最大激发波长 (Excitation Maximum, λ_ex):~638 nm
* 最大发射波长 (Emission Maximum, λ_em):~662 nm
CY5染料本身的性质:
CY5是一种花菁素类荧光染料,其分子结构决定了它的光学特性。它的最大吸收峰在649 nm附近,最大发射峰在670 nm附近。这个特性在溶液中是相对稳定的。
为什么波长不变?
荧光的发生源于染料分子中的电子从激发态回到基态时释放光子的过程。这个过程的能量差是固定的,由染料的共轭π键系统决定。谷氨酸部分并不参与这个共轭系统,因此不会改变CY5核心的电子跃迁能量,也就不会改变其波长。
实验注意事项
仪器设置:在使用荧光显微镜、流式细胞仪或酶标仪等设备检测CY5-谷氨酸时,应选择适用于Cy5等效染料的滤光片组。
激发光源:通常使用635 nm(常见激光线)或640-650 nm的LED光源进行激发。
发射光收集:通常使用660-700 nm的带通滤片(例如670/30 nm)来收集发射光。
环境因素:虽然标记物不影响最大波长,但溶液的pH值、极性、温度以及染料周围的局部环境(如是否发生聚集)可能会轻微影响荧光的强度(亮度)和峰形,但峰值位移通常很小(几个纳米内)。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)