在选择CY5.5-OVA、CY7-OVA和ICG-OVA时,您需要根据具体的实验目的、仪器设备和生物学问题来做出适宜的决策。
这三者的核心区别在于荧光染料的光物理性质,这决定了它们的成像深度、信噪比和与仪器设备的兼容性。
以下是详细的对比和选择:
特性对比表
波长解读:
CY5/CY5.5:处于可见光到近红外的边界,组织穿透能力有限,容易被血红蛋白等吸收,产生背景噪声。
CY7/ICG:处于近红外二区(NIR-I & NIR-II),组织在这个窗口吸收和散射光最少,自发荧光极低,因此穿透更深,信噪比极高。
如何选择?基于实验场景的决策指南
1. 选ICG-OVA的情况:
实验目的:极致追求活体深层组织成像穿透力和最高信噪比。
场景示例:
追踪抗原向深部淋巴结如腹腔内)的迁移。
需要长时间观察且对背景荧光干扰极其敏感的定量实验。
注意事项:
务必确认您的成像系统支持780nm附近的激发和检测。许多老式或基础型号的仪器可能无法高效检测ICG信号。
ICG容易光漂白,拍照时需控制曝光时间和激光功率。
2. 选CY7-OVA的情况:
实验目的:需要比Cy5.5更深一点的穿透力,但又担心设备不兼容ICG。
场景示例:
您的成像系统支持750nm激发,但又不确定是否能很好地检测820nm的ICG信号。Cy7是一个很好的“折中”选项。
希望进行双通道近红外成像,例如同时使用Cy5.5和Cy7标记两个不同的目标(如一个标抗原OVA,一个标某种细胞),由于波长分离足够大,可以很好地避免串色。
注意事项:
Cy7的波长介于Cy5.5和ICG之间,需要检查设备配置。
3. 选CY5.5-OVA的情况:
实验目的:平衡穿透力、亮度与设备兼容性,是最通用、最安全的选择。
场景示例:
大多数常规活体成像实验,如皮下注射后引流淋巴结的成像。
体外细胞实验:用流式细胞术或共聚焦显微镜研究树突状细胞、巨噬细胞等对抗原的吞噬。Cy5.5的亮度非常高,检测灵敏度极佳。
需要与绿色(如FITC)、红色(如Cy3)染料进行多色标记和成像,例如同时看不同细胞群或不同分子。
优势:
几乎所有现代的小动物活体成像系统和高端显微镜都标配了Cy5.5的滤波片组,兼容性无忧。荧光强度高,信号强,易于检测。
4. 选CY5-OVA的情况:
实验目的:亮度最高,光稳定性好,体外细胞实验(流式细胞术、共聚焦显微镜)。
场景示例:
浅层成像(如皮下注射、耳部成像、浅表淋巴结成像)。
可与绿色(如FITC)、红色(如Cy3)染料进行多色标记和成像,例如同时看不同细胞群或不同分子。
优势:
几乎所有流式细胞仪和共聚焦显微镜都配有检测Cy5的标准滤片组(通常称为APC或Cy5通道),检测灵敏度极高。
总结
1. 第一步:检查您的设备!
打开您的成像系统软件,查看它预设的荧光通道。你有Cy5.5(通常叫Cy5.5或APC-Cy7通道)、Cy7或ICG的选项吗?
这是一决定性因素。如果设备只支持到Cy5.5,那你的选择就只有Cy5.5-OVA。
2. 第二步:明确实验核心需求
体外细胞实验(流式、显微镜)?→ 优先选择Cy5-OVA;Cy5.5-OVA(亮度最高,兼容性最好)。
活体浅层成像(如皮下、浅表淋巴结)?→ 优先选择Cy5.5-OVA(性价比最高,信号强),预算不足可尝试Cy5-OVA。
活体深层成像(腹腔内、深部器官)?→ 如果设备支持,Cy7-OVA/ICG-OVA均可;需要穿透最佳,信噪比最高选择选择ICG-OVA;设备不支持则选Cy7-OVA。
需要做多色成像?→ 根据您其他染料的选择来搭配。例如,另一个染料是FITC(绿色)和Cy3(红色),那么Cy5.5-OVA或者Cy5是常见的第三通道。如果需要两个近红外通道,则可以用Cy5.5和Cy7组合。
简单来说:
做流式/显微镜? → CY5-OVA
做常规活体,设备一般? → CY5.5-OVA
做深部成像,设备高端? → CY7-OVA (更通用) 或 ICG-OVA (追求极致穿透)
预算有限且需要高亮度? → CY5-OVA
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)