选择适合多色成像的染料组合,特别是针对FITC、CY2、CY3、CY5、CY5.5、CY7这些染料,需要仔细考虑它们的光谱特性,以最大限度地减少光谱重叠和串扰。
1. 染料的光谱特性分析:
FITC :绿色荧光
- 激发波长:约490 nm
- 发射波长:约520 nm
CY2:绿色荧光
- 激发波长:约484 nm
- 发射波长:约502 nm
CY3:橘黄色荧光
- 激发波长:约540 nm
- 发射波长:约560 nm
CY5:红色荧光
- 激发波长:约638 nm
- 发射波长:约662 nm
CY5.5:远红色荧光
- 激发波长:约675 nm
- 发射波长:约700 nm
CY7:深红色荧光
- 激发波长:约740 nm
- 发射波长:约770 nm
2. 染料组合选择相关:
光谱分离最大化:选择染料时,应尽量选择激发和发射光谱差异较大的染料,以减少光谱重叠。例如,FITC/CY2与CY5/CY5.5/CY7的组合可以实现较好的光谱分离。
3. 常见的成像组合:
例:FITC、CY5
例:CY2、CY5
例:FITC、CY3、CY5.5
例:CY2、CY3、CY5.5
等等
4. 多色成像中的应用要求:
滤光片选择:根据所选染料的光谱特性,选择合适的滤光片。滤光片应能有效地激发目标染料,同时阻断其他染料的激发光和非特异性荧光。
光谱校正:在多色成像中,由于光谱重叠,通道间会存在串扰。需要进行光谱校正,以消除这些串扰,获得准确的成像结果。
实际应用案例:
细胞结构染色:可以使用这些染料组合对细胞内的不同结构进行标记,例如,细胞核、细胞质、细胞膜等。
免疫荧光:可以使用这些染料组合对细胞内的不同蛋白进行标记,从而研究蛋白的表达和定位。
活细胞成像:对于活细胞成像,应选择具有良好生物相容性和光稳定性的染料组合。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)