异硫氰酸荧光素(FITC)标记的透明质酸(HA-FITC)是一种将多糖与荧光探针结合的修饰分子,用于细胞摄取研究、靶向递送系统评估及生物屏障功能分析。
透明质酸(HA):
一种天然线性多糖(由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖胺重复单元组成),具有生物相容性、保湿性等等。
FITC标记:
FITC通过其异硫氰酸酯基(-N=C=S)与HA的羟基或氨基(如经乙二胺修饰后的伯氨基)反应,形成稳定的硫脲键(-NH-CS-NH-)。
荧光特性:激发波长~495 nm,发射波长~525 nm(绿色荧光)。
HA-FITC(荧光素标记透明质酸)使用指南
储存条件
HA-FITC冻干粉:-20℃避光保存(可分装,避免反复冻融)。
短期运输存储:4℃避光保存。
推荐溶剂:超纯水(可避光涡旋助溶)。
禁忌溶剂:含氨基的缓冲液(如Tris、甘氨酸)会干扰FITC荧光。
检测方法
荧光显微镜:直接观察绿色荧光(激发滤片480/40 nm,发射滤片535/50 nm)。
流式细胞术:分析细胞群体荧光强度(FITC通道,排除自发荧光对照)。
共聚焦显微镜联合DAPI等进行共定位。
注意事项
避光操作:全程使用铝箔包裹样品,避免荧光淬灭。
对照组设置:阴性对照,未标记HA处理组(排除自发荧光)。
分子量影响:低分子量HA(<10 kDa)易穿透细胞膜,高分子量(>100 kDa)依赖CD44内吞。
常见问题与解决方案
荧光信号弱:FITC标记率低或淬灭;可尝试缩短曝光时间。
非特异性背景高:未洗净游离HA-FITC或细胞死亡;增加PBS洗涤次数,检测细胞活性。
体内代谢过快:低分子量HA被肾脏快速清除;改用高分子量HA(>100 kDa)。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)