FITC-BSA(荧光素异硫氰酸酯标记的牛血清白蛋白)是一种荧光标记的模型蛋白衍生物,由常用载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)与绿色荧光标记物FITC通过化学键共价连接而成。该缀合物融合了BSA的生物相容性与FITC的荧光可视化特性,是生物医学研究、免疫检测及蛋白标记技术领域的基础工具,可用于蛋白的荧光追踪、免疫反应验证及细胞摄取研究等场景。
FITC(荧光素异硫氰酸酯)是生物医学中常见的荧光标记物之一,特性包括:
光谱特性:激发波长约495nm,发射波长约519nm,呈现明亮的绿色荧光;
成像优势:荧光强度高、背景干扰低、细胞渗透性好(适合活细胞标记),是荧光显微镜、流式细胞术的常用探针;
化学活性:含异硫氰酸酯基团(-N=C=S),可与生物分子(如蛋白、肽、抗体)的氨基反应,形成稳定的硫脲键连接。
FITC-BSA通过化学键(如氨基-异硫氰酸酯反应)将两者连接:
蛋白活性保留:连接位点通常选择BSA的非活性关键位点(如侧链氨基),保留其载体功能(如溶解性、稳定性);
荧光功能:FITC的荧光特性赋予缀合物实时追踪能力,可动态监测BSA的分布、代谢及与生物大分子/细胞的相互作用;
应用领域
蛋白动态追踪:FITC-BSA可作为模型蛋白,用于研究蛋白在细胞内的摄取、转运(如内吞途径)及亚细胞定位(如细胞膜、胞质、核内),解析蛋白与细胞结构的相互作用。
免疫反应验证:在酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光免疫层析(FIA)中,FITC-BSA可作为抗原或抗体标记物,通过荧光信号检测免疫反应的特异性(如抗原-抗体结合效率)。
载体性能评估:BSA本身是药物载体的常用模型,FITC-BSA可用于追踪载体在体内的分布(如血液、组织)、代谢(如酶解、排泄)及靶向性(如是否富集于特定器官/细胞)。
递送机制解析:结合细胞实验,研究载体通过内吞、膜融合等方式进入细胞的动态过程,优化载体设计(如粒径、表面修饰)以提高递送效率。
注意事项
储存条件:避光、-20℃保存,防止FITC荧光淬灭;长期保存可添加蛋白稳定剂(如甘油、BSA原液);
溶解性:通常可溶于PBS(pH 7.4)或水,使用前需避免强酸/强碱(可能破坏FITC结构)或高盐(可能沉淀蛋白);
标记比例影响:过高FITC比例可能导致BSA构象变化(影响载体功能)或荧光自淬灭(信号减弱),需根据实验需求优化标记比例;
光谱兼容性:使用前需确认实验体系(如荧光显微镜、流式细胞仪)的激发/发射波长范围是否匹配FITC光谱(495nm激发,519nm发射);若需多色荧光标记,需避免与其他荧光探针(如CY3、PE)的光谱重叠。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)