Sulfo CY3-NH2/amine常见产品问答(仅参考,不同温度、溶解、PH、实验等都会是影响因素)
Q: Sulfo CY3-NH2 和普通 CY3-NH2 有什么区别?
A: 最大区别在于水溶性。Sulfo CY3-NH2 带有磺酸基团,水溶性极佳,在含水缓冲液中不易聚集沉淀,背景低,特别适合活细胞应用、需要精确化学计量或避免有机溶剂的应用。普通 CY3-NH2 水溶性较差,标记时通常需要有机溶剂(如 DMF, DMSO),可能增加生物分子变性和非特异性吸附的风险,在含水环境中容易聚集导致荧光淬灭。
Q: 为什么我的标记效率很低?
A: 可能原因包括:
活化步骤失败或效率低(交联剂失活、比例不当、反应条件不合适)。
偶联反应 pH 不正确(NHS酯偶联通常需要 pH 8-9)。
缓冲液中含有游离氨基(如 Tris, Glycine, Ammonium salts)会竞争性消耗活化染料。
目标生物分子上的反应基团(氨基或巯基)数量不足或可及性差。
染料或生物分子失活/降解。
反应时间或温度不够。
Q: 标记后荧光信号弱或不稳定?
A: 可能原因:
染料本身降解(储存不当、反复冻融、光照)。
标记效率低(见上一问题)。
标记过程导致生物分子失活或聚集。
荧光淬灭:染料浓度过高发生自淬灭;环境因素(如特定离子、pH);光照过度(光漂白)。
实验体系的问题(如成像参数设置不当、固定不当导致抗原损失)。
Q: 溶解冻干粉时用什么溶剂好?
A: 无水 DMSO是常见选择。它能有效溶解染料并保持其稳定性。避免使用水或其他含水的溶剂直接溶解冻干粉,可能导致染料水解或形成不溶性聚集体。
Q: 如何去除未反应的游离染料?
A: 常用方法:
脱盐柱/凝胶过滤层析:常用、快速有效,基于大小分离。
透析:适用于大分子(如蛋白质),需要较长时间,注意避光。
超滤离心:速度快,但可能因膜吸附造成损失。
沉淀/再溶解:对某些蛋白质可能适用(如丙酮沉淀),但可能造成失活或回收率低。
Q: Sulfo CY3-NH2 可以用于细胞核染色吗?
A: 直接使用 Sulfo CY3-NH2 本身通常不能有效染色细胞核。它需要先共价连接到能靶向细胞核的分子上,然后通过该分子的靶向性进入细胞核并发出荧光。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)