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除了FITC,还有哪些荧光染料可用于标记溶菌酶?

时间:2025-07-25    阅读:247    点赞:0

除了 FITC(异硫氰酸荧光素),还有多种荧光染料可用于标记溶菌酶,这些染料通过共价键与溶菌酶的氨基、巯基等活性基团结合,既保留溶菌酶的生物学活性(如溶菌活性),又赋予其荧光示踪能力。

 

一、花菁类染料(Cy 系列)

花菁类染料是近红外荧光标记的常用选择,具有荧光强度高、光稳定性好、穿透性强(适合深层组织成像)等特点,常用的有:

Cy3:发波长约550 nm,发射波长约 570 nm(橙红色荧光),与 FITC 的绿色荧光可实现双通道成像,常用于溶菌酶与其他分子的共定位研究。

Cy5:激发波长约 649 nm,发射波长约 670 nm(近红外区),生物组织对该波段光的吸收和散射低,背景干扰小,适合活体细胞或动物体内溶菌酶的动态追踪。

Cy5.5:发射波长更长(约 694 nm),穿透性优于 Cy5,更适合深层组织或小动物活体成像。

花菁染料 

二、罗丹明类染料

罗丹明类染料荧光量子产率高、稳定性好,且颜色多样,适合多色标记,常见的有:

罗丹明 B(Rhodamine B):激发波长约 554 nm,发射波长约 576 nm(红色荧光),化学性质稳定,可通过异硫氰酸酯衍生物与溶菌酶的氨基结合。

TRITC(四甲基罗丹明异硫氰酸酯):激发波长约 547 nm,发射波长约 572 nm(橙红色荧光),与 FITC 的光谱重叠少,常作为 FITC 的互补染料用于双标实验(如同时标记溶菌酶和细菌表面受体)。

 

三、其他常用染料

荧光素衍生物(如 FAM):FAM(6-羧基荧光素)激发/发射波长与 FITC 类似(494 nm/520 nm),但稳定性更好,且可通过琥珀酰亚胺酯(NHS ester)与溶菌酶的氨基高效结合。

 

选择依据

不同染料的选择需根据实验需求确定,主要考虑因素包括:

成像方式:荧光显微镜(需匹配滤光片)、流式细胞术(光谱兼容性)、活体成像(穿透性);

实验体系:体外细胞(光稳定性)、动物体内(毒性、代谢);

多标需求:是否需要与其他染料(如细胞核染料 DAPI)共同使用,避免光谱重叠;

pH 敏感性:若研究溶菌酶在酸性环境(如吞噬体)中的作用,需选择 pH 不敏感的染料。

这些荧光标记的溶菌酶可应用于溶菌酶的细胞摄取、定位、与细菌的相互作用、体内代谢路径等研究中,为其生物学功能解析提供了可视化工具。

 

【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)

标签: FITC 溶菌酶
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