CY5,是一种常用的花菁类荧光染料 (Cyanine Dye)。发射波长在近红外区 (NIR-I,650-670 nm 发射峰),适合用于活体成像和深层组织成像。
它的化学结构上带有活性基团(如 NHS ester, Maleimide),可以与目标分子(如蛋白质、肽、小分子药物)上的特定基团(如氨基、巯基)发生共价结合。
CY5-毛兰素 (CY5-Erianin),是将CY5 荧光染料通过化学键共价连接到毛兰素分子上形成的复合物。
它是一种荧光探针,可以赋予毛兰素荧光信号,使得研究人员能够实时、可视化地追踪毛兰素在生物系统中的行为。
科研方向(仅参考,未单独验证)
1、细胞摄取与定位研究:将CY5-毛兰素 添加到培养的细胞中(通常是肿瘤细胞系),孵育一段时间。
检测:
荧光显微镜/共聚焦显微镜:直接观察 CY5 的红色荧光信号,确定毛兰素在细胞内的分布(例如,是否富集在细胞核、细胞质、细胞器如线粒体或溶酶体?是否与微管共定位?)。
流式细胞术:定量分析细胞群体对CY5-毛兰素的摄取量以及不同时间点的摄取动力学。
目的:了解毛兰素如何进入细胞、进入效率、在细胞内的分布特征。
2、体内分布与药代动力学研究:将CY5-毛兰素通过静脉注射等方式给予实验动物。
检测:
小动物活体荧光成像:在给药后不同时间点,使用小动物活体成像仪观察 CY5 荧光信号在全身的分布情况。
离体器官成像:在实验终点处死动物,取出主要器官和肿瘤,进行离体荧光成像,更精确地定量各组织中的药物含量(通过荧光强度)。
目的:评估毛兰素在活体内的分布特性、靶向效率、代谢清除途径(主要通过肝还是肾?)、体内滞留时间,为优化给药方案和剂型设计提供依据。
如何使用
1、溶解性:通常溶于DMSO、DMF等有机溶剂。
2、保存:严格避光、干燥、低温(常为-20°C)保存。分装避免反复冻融。
3、配制储存液:通常用高纯度无水 DMSO 配制成适宜实验浓度的母液。避光操作!
4、工作液配制:用合适的缓冲液(如PBS,细胞培养基)将母液稀释至所需的工作浓度。
注意:建议现用现配,避免溶解后存储。
科研应用(仅参考,未单独验证)
成像/检测:
1、显微镜:直接加入少量缓冲液或抗淬灭封片剂,立即在配备相应滤光片(激发/发射波长匹配CY5)的荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察拍照。
2、流式细胞术:收集细胞(注意轻柔操作,避免损伤细胞),PBS洗涤后重悬,上机检测CY5通道(通常为APC/Cy5通道附近)的荧光信号。
动物实验:
建立合适的动物模型。
通过尾静脉注射或其他途径给予一定剂量的 CY5-毛兰素。
活体成像:在预定时间点(如30min, 1h, 2h, 4h, 6h, 12h, 24h, 48h等),将麻醉后的小鼠置于小动物活体成像仪中,使用适用于CY5的激发/发射滤光片组进行成像。分析荧光信号在全身及局部区域的强度。(活体成像,注意小鼠体积,一般考虑更深穿透染料,如CY5.5、CY7)
(可进入了解:FITC、CY3、CY5和CY7?怎么选择合适的荧光标记 仅参考)

注意事项
荧光标记可能改变原药性质:连接上CY5分子后,毛兰素的分子量、电荷、疏水性、空间结构都可能发生改变,这有可能影响其:
1、细胞摄取效率:可能变快或变慢。
2、生物活性/药效:CY5-毛兰素的直接细胞毒性可能与未标记的毛兰素不同。它主要用于示踪,不能完全等同于原药进行药效评价。评估药效时必须使用未标记的毛兰素或证明标记后活性保留。
3、药代动力学行为:分布、代谢、排泄可能不同于原药。
光稳定性:花菁染料存在光漂白问题。实验过程中需严格避光操作(用锡箔纸包裹样品管、在暗室或弱光下操作),缩短曝光时间。
背景干扰:活体成像时,肠道食物、毛发、某些组织的自发荧光可能造成背景干扰。实验前剃毛、使用近红外二区染料或进行光谱分离有助于减少干扰。
浓度控制:用于成像的浓度应尽可能低,以减少潜在的非特异性结合和毒性干扰。需要优化浓度和孵育时间。
对照实验-设置严格的对照:
1、未处理细胞/动物:检测自发荧光背景。
2、游离CY5染料处理组:排除染料本身(非药物部分)的摄取和分布影响。
3、未标记毛兰素竞争组:验证结合的特异性。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)