CY5-NHS ester使用简明概述，适用于蛋白质、抗体、肽或其他含伯胺（-NH₂）生物分子的标记：
核心原理
CY5-NHS ester与生物分子中的伯胺基团（-NH₂）在碱性条件下发生亲核反应，形成稳定的酰胺键，实现共价标记。CY5是近红外荧光染料（Ex/Em：~650/670 nm），适用于低背景成像。
操作步骤
1. 试剂准备
溶解染料：用无水DMSO或DMF配制CY5-NHS ester储存液，避光。
样本处理：将待标记蛋白溶解于适宜PH值的缓冲液中，避免含胺试剂（如Tris、甘氨酸）。
2. 标记反应
染料/蛋白摩尔比：需要根据具体实验小试优化后确定，过量染料可能导致过度标记。
混合：将染料DMSO溶液缓慢加入蛋白溶液，涡旋混匀。
孵育：避光、室温反应，或4℃过夜。
3. 纯化
去除游离染料：使用脱盐柱（如PD-10）、透析或超滤离心管，用PBS或所需缓冲液置换。
验证：通过紫外-可见光谱（CY5在650 nm有特征峰）或SDS-PAGE（荧光扫描）确认标记效率。
注意事项
避光避湿：NHS酯易水解，操作全程避光、保持干燥，使用无水溶剂。
缓冲液选择：避免胺类缓冲液；可添加少量DMSO助溶。
染料用量：过高比例可能导致蛋白聚集或失活，需优化。
温度控制：高温加速水解，建议室温或4℃反应。
储存：标记后产物避光4℃短期保存，长期存于-20℃（避免反复冻融）。
适用应用
荧光成像：细胞标记、组织切片染色（近红外区穿透力强）
流式细胞术：抗体标记检测表面抗原
蛋白互作研究：FRET、荧光偏振（需控制染料/蛋白比）
体内示踪：近红外光减少组织自发荧光
替代方案
若目标分子无伯胺基团，可改用：
巯基（-SH）标记：使用CY5-马来酰亚胺（Mal）
醛基/酮基标记：使用CY5-酰肼（Hydrazide）
提示：首次标记建议小规模测试不同染料/蛋白比例，通过荧光强度与蛋白活性评估最佳条件。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
