CY5-NHS ester产品使用中的常见问题解答(仅参考):
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1、如何保存CY5-NHS ester?
答:
温度:避光保存在-20°C (干燥环境)。
固体粉末:在干燥避光条件下可稳定保存 ≥2 年。
溶解后:建议立即使用,避免反复冻融。
防潮防光:使用干燥剂密封保存,操作时避光。
2、标记后荧光信号弱怎么办?
答:可能原因与对策:
染料水解失效:使用新鲜配制的染料母液
标记比例过低:增加染料投料比(优化至 10:1)
纯化过程损失:缩短纯化时间,避免过度透析
缓冲液含干扰物:确保缓冲液无氨基、硫醇基
激发/发射波长错误:校准仪器参数(CY5需红光激光器)
3、CY5-NHS ester能否标记核酸?
答:
不建议直接标记:NHS酯靶向氨基,而核酸缺乏伯氨基。
可间接标记:合成带氨基修饰的寡核苷酸(如 5'-Amine modifier)。
将CY5-NHS酯与该氨基修饰的核酸反应。
4、标记后蛋白沉淀/聚集如何解决?
答:
原因:染料过量、疏水性增强或缓冲液不当
挽救步骤:
1. 降低染料/蛋白比(如2:1)重新标记
2. 添加 5-10%甘油或0.1% BSA 减少疏水作用
3. 置换缓冲液为 PBS + 0.05% Tween-20(非离子表面活性剂)
5、CY5-NHS与Sulfo-CY5-NHS对比
答
水溶性:
CY5-NHS低(需有机溶剂);Sulfo-CY5-NHS高(可直接水溶)
细胞穿透性:
CY5-NHS强(适细胞内膜标记);Sulfo-CY5-NHS弱(限于细胞表面)
电荷影响:
CY5-NHS中性(不易干扰靶点);Sulfo-CY5-NHS带负电(可能影响互作)。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)