流式细胞术对荧光素的选择搭配有着很高的要求,尤其是对于多色实验来说,荧光素搭配效果直接影响到检测效果,所以各种荧光素偶联的抗体是必不可少的。
荧光素按激发光波长来分,主要是激发波长为375nm、405nm、488nm和633nm四类。其中,常用的是激发波长为488nm和633nm的荧光素,如FITC、PE、APC、PI等。
罗丹明是一种邻苯二酚类荧光染料,主要用于生物染色,其是一类化合物总称,包括罗丹明B,罗丹明123等。
异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate isomer)这是一类试剂的总称,包括异硫氰酸荧光橙红,异硫氰酸荧光黄,异硫氰酸荧光红,异硫氰酸荧光素异构体I等。
抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等,还有一些其他的标记方法例如金标记,星戈瑞分享的是这些抗体标记的基本原理、操作步骤。
FITC标记抗体的原理:在碱性条件下(pH8.5以上),FITC的异硫酸基在水溶液中与免疫球蛋白的赖氨酸r氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键,成为标记荧光免疫球蛋白,即荧光抗体。一个Ig分子上能标记15~20个FITC分子。
荧光抗体技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。通过对免疫荧光技术的原理、标本制作、实验类型和应用的概述,介绍了免疫荧光技术方法,为实际应用提供参考。
荧光染料是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。可以单独使用,也可组合成复合荧光染料使用。 有机荧光材料在生物成像方面是种应用性很强的发光材料,可广泛应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性DNA染色、标记蛋白质、活体成像和环境检测等领域研究。
Bodipy氟化硼二吡咯类荧光染料相对比于荧光素、罗丹明或者菁染料有着较高的选择性、高灵敏度、高荧光量子产率、高摩尔消光系数、光学稳定性和对PH不敏感被应用于生物标记、荧光探针及生物成像,星戈瑞荧光stargraydye可提供不同Bodipy荧光染料,荧光波长可定制 从550-800之间,末端可以修饰各种活性基团。