氟硼吡咯染料(BODIPY 类染料)结构如图所示,作为一种常见的近红外荧光染料,具有摩尔消光系数高、光稳定性好、结构易于修饰、对极性和pH不敏感、吸收峰和发射峰较窄以及荧光量子产率高等优点,被应用于生物成像技术。
硅-罗丹明是用二甲基硅基替换四甲基罗丹明母核中的氧原子得到的一类具有长发射波长、光稳定性好的荧光染料、以及标记时荧光背景低的荧光染料。SiR染料最大激发波长 652 nm,最大发射波长674 nm,处于红外光区;光稳定性好,可应用于高分辨成像;在溶液中常处于闭环状态,因而标记时荧光背景非常低。
异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,这种荧光染料用于免疫荧光和流式细胞术中。在495/517nm处,该染料会产生激发/发射峰值,并可借助异硫氰酸盐反应基团与不同抗体结合,该基团可以和蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合。
Cy (Cyanine)系列,也叫菁染料,即花青素系列荧光染料是具有多聚次甲基桥链化学结构特点的一类合成荧光染料。Cy染料的消光系数非常高,桥链长度和两端的发色团直接控制着染料的吸收峰和发射峰值。菁染料Cy系列常分为脂溶性Cy染料、水溶性Cy染料。
Cy3 SE是一种近红外荧光标记染料,可溶于有机溶剂如 DMSO,DMF,被用于标记肽、蛋白质和寡聚体等生物分子。
荧光素FITC标记抗体之Chadwick法介绍
FITC,中文名异硫氰酸荧光素,又称为荧光素-5-异硫氰酸盐,英文全称Fluorescein Isothiocyanate,其形态为黄色粉末,具有高吸收率、荧光量子产率和良好的水溶性等特点,是生物学中应用的一种绿色荧光素衍生物。
抗体:用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的,一般为纯化后的单抗或多抗。
荧光免疫技术是根据抗原抗体反应的原理,将不影响抗原抗体活性的免疫荧光色素标记在抗体或抗原上,与其相应的抗原或抗体结合后,利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。该法包括直接法和间接法。
荧光免疫技术是根据抗原抗体反应的原理,将不影响抗原抗体活性的免疫荧光色素标记在抗体或抗原上,与其相应的抗原或抗体结合后,利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。该法包括直接法和间接法。