FITC(异硫氰酸荧光素)是一种荧光素衍生物。可作为荧光探针应用于制备分子生物学或糖类聚合物的结合物分子,FITC常用作蛋白质或多糖的不同底物的标记试剂。
随着蛋白荧光标记技术不断发展,各类荧光素应用于生物实验中,目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。
星戈瑞简介代谢标记策略法制备荧光蛋白标记技术
生物素标记蛋白可以解决蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能,乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。
荧光蛋白的改造工作主要集中于提高荧光蛋白的亮度,改变Stokes位移(指激发峰与发射峰之间的距离)和光谱特性,以及寻找新型光转换/光激活荧光蛋白等方面。
荧光标记就是用荧光基团特异性来标记细胞或者组织样品中所感兴趣的区域。常用的荧光标记方法有表达荧光蛋白、抗体偶联免疫荧光染料、细胞器及DNA特异性染料、离子敏感型荧光探针和双光子荧光染料等。
荧光探针是能对特定刺激(如温度、pH、特定物质或离子等)产生响应或对生物标本特定区域进行定位的荧光团(荧光染料)。
荧光光谱是把荧光的能量--波长关系作出来的关系图,所以想要了解荧光的特点首先就要了解荧光光谱。
常见的抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等,还有一些其他的标记方法例如金标记,星戈瑞简要介绍辣根过氧化物酶(HRP)标记。
当FITC在碱性溶液中与抗体、蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的ε-氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合(形成硫碳氨基键),形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。