中文名称：Cy3标记苯磷硫胺
英文名称：Cy3-labeled Benfotiamine
别称：Cy3-Benfotiamine
材料类别：可见光荧光标记苯磷硫胺衍生物
Cy3-Benfotiamine是Cy3荧光团与苯磷硫胺衍生结构形成的标记物。使用时可先根据产品说明选择适配溶剂配制储备液，再按实验体系逐步稀释，避免直接在高盐水相中造成析出或聚集。Cy3适用于常见橙红荧光通道，但具体激发和发射峰应以实际产品数据为准。实验过程中建议设置空白、游离染料和未标记母体对照，并控制各组有机溶剂终浓度一致，以降低溶剂差异对结果解释的影响。
产品基本信息与理化特性
项目 |
参数 |
产品名称 |
Cy3标记苯磷硫胺（Cy3-Benfotiamine） |
分子式 |
C₄₉H₆₄ClN₇O₉PS₂（典型结构，连接臂为酰胺键） |
分子量 |
约 1017.6 Da |
外观 |
橙红色至深红色冻干粉末或溶液 |
溶解性 |
溶于DMSO（≥10 mg/mL）、DMF；微溶于PBS（pH 7.4，约0.5~1 mg/mL）；不溶于纯水 |
荧光特性 |
Ex/Em = 550~555 nm / 565~570 nm（溶剂依赖性） |
摩尔消光系数 |
ε ≈ 150,000 M⁻¹·cm⁻¹（在甲醇中） |
量子产率 |
约 0.15 ~ 0.20（在PBS中） |
纯度（HPLC） |
≥ 95% |
储存条件 |
-20°C避光密封，冻干粉保质期24个月 |
结构要点提醒：苯磷硫胺分子含有一个游离的伯氨基（—NH₂）或羟基（取决于偶联位点），该基团是连接Cy3-NHS酯的关键锚点。连接臂通常引入3~6个乙二醇（PEG）单元以增加水溶性并降低空间位阻。
适用范围与典型应用场景
适用样本类型
活细胞：神经元、肝细胞（HepG2）、胰腺β细胞（MIN6）、巨噬细胞（RAW 264.7）
固定细胞/组织切片：免疫荧光染色共定位研究
离体器官：新鲜分离的脑片、心脏切片
小型动物模型：小鼠、大鼠（尾静脉或腹腔注射）
生物流体：血清、脑脊液（需配合标准曲线进行定量）
应用方向
硫胺素转运体（THTR-1/THTR-2）活性评估——定量分析不同病理状态下细胞对苯磷硫胺的摄取效率。
转酮醇酶激活可视化——通过荧光信号强度变化间接反映细胞内ThDP水平波动。
血脑屏障穿透性研究——实时监测探针在小鼠脑实质中的分布动力学。
线粒体靶向共定位——与MitoTracker等线粒体探针联合使用，验证苯磷硫胺的线粒体保护效应。
氧化应激条件下的代谢重编程示踪——结合高糖/缺氧模型，观察硫胺素补充对代谢通路的荧光表型影响。
使用前的准备工作
1 储存与复溶
冻干粉复溶：使用前将冻干品从-20°C取出，避光平衡至室温（约15分钟）。加入无菌无水DMSO配制为 1 ~ 5 mM 储备液（例如：1 mg粉末溶于约 0.98 mL DMSO）。轻轻振荡至完全溶解（可辅助短时超声水浴，≤30秒）。
分装保存：将储备液分装为单次用量（如每管10~20 μL）于棕色微量管中，-20°C避光保存，避免反复冻融，分装后溶液可稳定保存约3个月。
工作液配制：实验当天用预温（37°C）的无血清培养基或PBS将储备液稀释至所需工作浓度（推荐起始浓度：1 ~ 10 μM，具体需根据细胞系预实验优化）。
2 关键仪器与耗材检查
荧光检测系统：确保激光器或激发滤光片支持550~555 nm激发，发射收集通道设置为570~580 nm（带通滤光片）。
对照设置：每次实验必须包含以下对照——
未染色细胞/组织（背景扣除）
过量未标记苯磷硫胺竞争组（验证靶向特异性，100倍摩尔过量）
游离Cy3染料对照（排除非特异性吸附）
3 安全注意事项
Cy3-Benfotiamine为潜在光敏剂，操作时建议佩戴护目镜及丁腈手套。
DMSO具有皮肤渗透性，配制时应使用密闭容器并在通风橱内操作。
废弃物需按含卤素有机染料标准处理，不可直接排入下水道。
产品保存与稳定性补充要点
鉴于使用过程中探针需多次取用，特补充操作阶段保存要点：
工作液稳定性：稀释后的工作液（1~10 μM）在4°C避光条件下可稳定 ≤6小时，室温下应在 2小时内 用完。
染色后样本保存：染色并固定后的玻片样本，封片后于4°C避光保存，荧光信号在 48小时内 保持稳定（衰减<15%）；长期保存（>1周）建议存放于-20°C并加厚封片剂。
冻融警示：储备液若已分装，每管仅限一次解冻使用，剩余液体不可回冻。
同系列对照产品
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Cy3-Benfotiamine作为一类兼具生物活性与光学追踪功能的双模态探针，为维生素B1代谢研究及代谢性疾病探针开发提供了有力工具。然而，其使用效果高度依赖于操作细节的标准化——从复溶分装、染色条件优化，到成像参数设置与数据分析，每一个环节的疏忽都可能导致数据失真。
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