中文名称：ICG标记蛋白L
英文名称：ICG-labeled Protein L
别称：ICG-Protein L、吲哚菁绿标记蛋白L
ICG标记蛋白L（ICG-Protein L）是一种将近红外荧光染料吲哚菁绿（ICG）与蛋白L（Protein L）偶联的产物。蛋白L能特异性结合免疫球蛋白的κ轻链，而ICG则赋予其近红外成像能力。其制备通常依赖化学偶联法，核心是使用ICG的NHS酯（ICG-NHS ester） 与蛋白L上的氨基（-NH₂）反应，形成稳定的共价键。
材料介绍与物理化学性质
Protein L可与部分免疫球蛋白轻链区域结合。引入ICG后可在保留蛋白结合属性的基础上增加近红外荧光读出，用于抗体相关示踪、结合与检测方法开发。
常见为绿色冻干物或溶液。蛋白与ICG均对环境条件较敏感，应低温、避光保存，复溶后尽量分装，避免多次冻融。
荧光偶联会改变母体材料的局部电荷、疏水性和分子量，因此标记物与未标记原料在溶解、吸附、迁移和结合表现上可能存在差异。对于多糖和蛋白类材料，产品通常是具有一定平均标记度的混合偶联体系；对于小分子探针，则需关注连接位点、连接臂以及是否存在异构体。实际实验参数应以批次资料和预实验结果为依据。
研究步骤
实验步骤详解
1. 实验准备
蛋白L的准备：将蛋白L溶解于不含一级胺（如Tris、甘氨酸）的缓冲液中，例如PBS (pH 7.0-8.5) 或碳酸盐缓冲液 (pH 8.0-9.0)。为获得标记效果，蛋白浓度建议调整至 2-10 mg/mL，纯度应不低于90%。操作前可将蛋白溶液短暂离心，使液体集中于管底。
ICG染料的准备：使用高品质的无水DMSO 溶解ICG-NHS酯，配制成储备液（例如 10-20 mg/mL）。ICG-NHS酯对光敏感，储备液需现配现用，并严格避光。若无法一次用完，可将储备液分装后于 -20℃或-80℃ 避光保存。
器材与条件：准备离心管、移液器等，并确保所有操作全程避光（如使用锡箔纸包裹）。
2. 偶联反应
计算染料用量：根据蛋白L的摩尔量，计算所需ICG-NHS酯的量。推荐的ICG:蛋白L的摩尔比通常在5:1到20:1之间，10:1是一个常用的起始比例。具体用量可根据蛋白量和分子量进行计算。
进行偶联：将计算好的ICG-NHS酯储备液缓慢滴加到蛋白L溶液中，同时轻轻混匀。
孵育反应：将混合液在室温下避光孵育。孵育时间从15-60分钟到1-2小时不等，也可在4℃下孵育过夜。期间可轻柔振荡，但避免剧烈搅拌以防蛋白变性。
淬灭反应（可选）：孵育后，可加入含一级胺的淬灭缓冲液（如50-100 mM Tris或甘氨酸），室温孵育10-15分钟，以终止反应并消耗未结合的ICG-NHS酯。
3. 产物纯化
反应结束后，需去除未反应的游离ICG染料，常用方法有：
透析法：将反应液转入透析袋，在PBS缓冲液中于4℃避光透析24-48小时，期间更换缓冲液3-4次。
凝胶过滤层析法：使用脱盐柱（如Sephadex G-25或PD-10脱盐柱），以PBS为洗脱液进行纯化。首先流出的有色组分即为所需的ICG-蛋白L偶联物。
4. 产物鉴定与储存
标记效率验证：使用紫外-可见分光光度法测定纯化产物的吸光度。在 280 nm 处的吸收用于测定蛋白浓度，在 ~785 nm 处的吸收用于测定ICG浓度。通过计算可得出每个蛋白分子上连接的ICG分子数（标记率）。
蛋白活性验证：通过ELISA或流式细胞术等功能性实验，确认标记后的蛋白L是否仍保留与免疫球蛋白κ轻链结合的能力。
储存：纯化后的ICG-Protein L应于 4℃避光 保存。为长期保存，可加入稳定剂（如 5-10 mg/mL BSA）和抑菌剂（如 0.01-0.03% 叠氮化钠）。若需在-20℃冷冻保存，可加入50%甘油作为防冻剂。
💡 核心注意事项
严格控制pH：偶联反应需在弱碱性环境（pH 8.0-9.0） 下进行，以保证蛋白L上的氨基处于反应活性状态。缓冲液必须不含一级胺，否则会与蛋白L竞争，导致标记失败。
全程严格避光：ICG对光敏感，从试剂准备到最终储存，所有操作均需在避光条件下进行。
使用新鲜、高纯度的试剂：建议使用高品质的无水DMSO 溶解ICG-NHS酯，并确保蛋白L的纯度≥90%，这些是成功标记的基础。
进行预实验优化：由于不同批次的蛋白L活性可能存在差异，建议在正式实验前，尝试不同的ICG与蛋白摩尔比（如5:1、10:1、20:1），以确定标记率和蛋白活性的条件。
同系列产品（不同荧光标记 ProteinL）
1. Cy3-ProteinL，Cy3 标记蛋白 L，橙红色荧光
2. Cy5-ProteinL，Cy5 标记蛋白 L，远红荧光
3. Cy7-ProteinL，Cy7 标记蛋白 L，近红外荧光
4. FITC-ProteinL，FITC 荧光素标记蛋白 L
5. Rhodamine-ProteinL，罗丹明标记蛋白 L
6. Alexa Fluor488-ProteinL、Alexa Fluor647-ProteinL，Alexa Fluor 系列标记蛋白 L
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品，不参与保证任何实验，具体应用还需参考相关实验设计及文章！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
