中文名称：Cy5.5标记链霉亲和素-辣根过氧化物酶复合物、花菁染料Cy5.5标记链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物
英文名称：Cy5.5-Streptavidin-HRP conjugate、Cyanine5.5-Streptavidin-Peroxidase
别称：Cy5.5-SA-HRP、Cy5.5标记链霉亲和素-过氧化物酶复合物
一、材料介绍
Cy5.5-Streptavidin-HRP是一种将近红外荧光染料Cy5.5、链霉亲和素（Streptavidin, SA）与辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）通过共价偶联形成的多功能荧光-酶复合标记物。该材料整合了三种组分的核心功能：Cy5.5提供近红外荧光检测能力，链霉亲和素提供与生物素的高亲和力结合（解离常数约10⁻¹⁵ M），HRP提供酶催化信号放大功能。
链霉亲和素是从链霉菌中分离得到的四聚体蛋白，每个亚基含有一个生物素结合位点。相比鸡蛋清来源的亲和素，链霉亲和素在中性pH条件下净电荷较低、不含糖基化修饰，非特异性吸附相对较少。HRP则是一种分子量约44 kDa的糖蛋白，能够催化过氧化氢将多种底物转化为可检测的产物。Cy5.5作为花菁类近红外荧光染料，其激发波长约678 nm，发射波长约694 nm。
二、产品物理化学性质
外观：深蓝色至蓝绿色粉末或冻干固体
溶解性：可溶于水及PBS、HEPES等生理缓冲液
纯度：95%以上
分子量：复合物分子量主要取决于链霉亲和素四聚体（约60 kDa）及其上偶联的HRP与Cy5.5数量
光谱特性：Cy5.5激发峰约675–680 nm，发射峰约694 nm，属于近红外波段（650–900 nm），该波段可有效避开生物组织自发荧光干扰
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融
运输条件：冰袋或室温（2周内）
保质期：妥善保存条件下约1年
三、实验技巧与操作要点
3.1 工作浓度与稀释
Cy5.5-Streptavidin-HRP的推荐工作浓度需根据具体实验体系进行优化。在微阵列杂交检测中，曾有研究使用18 μg/mL的Cy5.5标记链霉亲和素进行可视化检测。不同实验体系（ELISA、Western Blot、免疫组化、免疫荧光、流式细胞术等）对工作浓度的要求存在差异。建议从较低浓度开始进行梯度稀释测试，以确定信号强度与背景之间的平衡点。
3.2 孵育条件
孵育温度和时间对结合效率有直接影响。在ELISA板检测中，链霉亲和素-HRP复合物的孵育通常在室温条件下进行30分钟左右。对于组织切片或细胞样品的免疫荧光染色，可参考常规HRP标记物的孵育流程。孵育缓冲液通常采用PBS（pH 7.2–7.4），添加适量的封闭剂（如BSA或脱脂奶粉）有助于降低非特异性吸附。
3.3 洗涤步骤
充分的洗涤是控制背景信号的关键环节。建议在孵育后使用含Tween-20的PBST缓冲液进行多次洗涤（如3次×5分钟）。洗涤次数和时间的调整应根据实验体系的特点进行优化——对于微阵列或芯片类实验，洗涤更需充分以去除未结合探针。
3.4 荧光信号采集
Cy5.5的荧光信号采集需要配备相应滤光片组或激光器（常用633 nm或640 nm激发光源）。为减少光漂白，建议使用较低的激发光强度，并限制样品在激发光下的暴露时间。在长时间成像实验中，可考虑在缓冲液中添加抗淬灭剂。对于活细胞或活体成像，需注意控制激光功率和曝光时间以避免对样品造成损伤。
3.5 HRP酶活性保护
HRP的酶活性易受温度、pH及氧化环境的影响。实验操作中应注意：避免使用含叠氮化钠的缓冲液（叠氮化物会抑制HRP活性）；底物反应应在推荐的时间窗口内进行；样品保存时应避免反复冻融。在一项验证实验中，Cy5.5荧光信号在链霉亲和素-HRP偶联的珠子上被成功检测到，且HRP活性未因偶联和固定化过程而丧失。
3.6 避光操作
Cy5.5对光敏感，整个实验过程（从稀释、孵育到信号采集）应注意避光操作。建议使用锡箔纸包裹试管或使用棕色离心管，减少环境光对荧光信号的淬灭影响。
四、星戈瑞相关产品供应
西安星戈瑞（Stargray）提供Cy5.5系列荧光标记产品及相关服务：
Cy5.5标记链霉亲和素（Cy5.5-Streptavidin） ：由近红外荧光染料Cy5.5与链霉亲和素通过共价键偶联而成。该产品可作为中间体用于后续与生物素化HRP或其他生物素化分子的复合组装。
Cy5.5荧光标记抗体/蛋白试剂盒：通用型标记试剂盒，通过抗体或蛋白上的伯胺基团（如赖氨酸）实现Cy5.5与目标分子的共价偶联。该试剂盒可用于自行制备Cy5.5标记的链霉亲和素或HRP偶联物。
磺化Cy5.5（Sulfo-Cy5.5）系列产品：星戈瑞可提供磺化Cy5.5染料，包括Sulfo-Cy5.5 NHS酯、Sulfo-Cy5.5马来酰亚胺等活化形式。磺化修饰可增强染料水溶性，标记后不易引发蛋白疏水性聚集。
相关定制服务：星戈瑞可根据科研项目需求开展不同荧光染料、不同标记比例及不同分子量规格的链霉亲和素复合物定制开发。
温馨提示：本产品及相关试剂仅供科研使用，不能用于人体实验及临床诊断。
