一、TRITC标记小扁豆凝集素
中文全称为四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸标记小扁豆凝集素,
英文名称为Tetramethylrhodamine-5(6)-isothiocyanate labeled Lens culinaris Agglutinin,
简称TRITC-LCA或TRITC-LcH。
该试剂亦常被称为TRITC-小扁豆凝集素、TRITC-扁豆凝集素偶联物或罗丹明标记的小扁豆凝集素。小扁豆凝集素本身来源于小扁豆(Lens culinaris)种子,属于植物来源的凝集素蛋白。
二、物理化学性质
TRITC-LCA的物理化学性质可以从荧光染料部分和凝集素蛋白部分两个维度加以理解。
荧光特性方面,TRITC(四甲基罗丹明异硫氰酸)是一种橙红色荧光染料,其激发波长545-555 nm,发射波长570-580 nm,荧光呈橙红色。TRITC的激发光谱与532 nm激光器匹配度较高,这使得TRITC-LCA适用于共聚焦显微镜和流式细胞仪等配备该波长激光器的成像系统。TRITC的分子量约为479 g/mol,属于罗丹明家族的衍生物,其荧光活性源于分子内大的共轭芳香电子系统。
蛋白部分方面,小扁豆凝集素(LCA)的分子量约为46-49 kDa,由两个较大的亚基(约17 kDa)和两个较小的亚基(约7-8 kDa)组成。LCA的糖结合特异性为α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖,可被α-甲基甘露糖苷和α-甲基葡萄糖苷抑制。LCA的凝集活性依赖于钙离子(Ca²⁺) 和锰离子(Mn²⁺) 的存在。LCA存在LCA-A和LCA-B两种异构体,均能使人血红细胞凝集,但该反应不具有血型特异性。
储存与稳定性方面,TRITC-LCA通常以液体形式供应,溶剂体系为10 mM HEPES、150 mM氯化钠及微量二价离子。TRITC偶联物对光较为敏感,需避光保存。短期保存可在4°C条件下进行,长期保存建议分装后于-20°C冷冻保存,应避免反复冻融。分装后的样品在-20°C条件下可稳定保存约6个月。
三、小扁豆凝集素概述
小扁豆凝集素(Lens culinaris agglutinin,LCA)是从小扁豆种子中经亲和层析等方法分离纯化得到的一种植物糖蛋白。作为凝集素家族的一员,LCA能够与细胞表面或组织中的特定碳水化合物结构发生特异性结合。LCA对α-甘露糖和α-葡萄糖残基的识别能力使其在糖生物学研究中具有应用价值。
TRITC-LCA的工作原理基于荧光标记技术与凝集素-糖识别作用的结合。TRITC作为荧光报告基团通过异硫氰酸基团与LCA蛋白分子上的氨基等基团共价偶联。当TRITC-LCA与待测样本孵育时,LCA部分特异性识别并结合细胞表面或组织切片中带有α-甘露糖/α-葡萄糖残基的糖蛋白、糖脂或寡糖链。未结合的TRITC-LCA经洗涤去除后,通过合适波长的激发光(如532 nm激光或545-555 nm波段光源)激发TRITC,即可在570-580 nm波段观察到橙红色荧光信号。该荧光信号的位置和强度反映了目标糖基化结构的分布与相对丰度。
在具体实验应用中,TRITC-LCA可用于细胞表面糖基化模式分析、糖蛋白在细胞膜上的定位观察、组织切片中糖缀合物的分布检测,以及流式细胞术中的细胞亚群糖基化差异分析。由于LCA对α-甘露糖和α-葡萄糖的特异性识别,TRITC-LCA还可用于研究病理状态下细胞表面糖基化修饰的变化。在多通道荧光成像实验中,TRITC的橙红色荧光可与FITC(绿色荧光)等其它荧光标记物配合使用,实现多靶标的同时检测。
此外,LCA在亲和色谱领域也有应用——固定在色谱柱上的LCA可用于糖缀合物(如糖蛋白)的分离纯化。TRITC标记版本则侧重于荧光检测与成像场景。
四、不同形态与规格(星戈瑞供应)
星戈瑞(Stargraydye)作为荧光染料及荧光标记试剂的供应商,提供包括TRITC在内多种荧光染料及荧光标记蛋白、多肽、聚合物、糖类等不同方向的定制服务。该公司可提供发射波长范围380-1080 nm之间、具有不同量子产率、颜色及理化性质的荧光染料产品。
在荧光标记凝集素产品线方面,星戈瑞可提供包括FITC-LCA、TRITC标记凝集素在内的多种荧光功能化蛋白分子。产品形态方面,星戈瑞供应的荧光标记蛋白类试剂可提供固体、粉末或溶液等不同形态。常规产品纯度在95%以上。储存条件一般为-20°C避光、干燥保存。
关于TRITC-LCA的具体供应规格,用户可向星戈瑞咨询当前可提供的包装规格(如毫克级定量包装)、产品浓度、溶剂体系及定制化需求(如不同标记比例或特殊缓冲液体系)。星戈瑞同时也提供荧光标记定制服务,可依据科研人员的具体实验目标进行分子结构与功能的定制开发。
五、参考文献
Biozol. Lens culinaris (LCA/LCH) (TRITC). Product specifications.
Creative BioMart. Native Lentil Lens culinaris Lectin (LCA/LCH), TRITC-Conjugated. Cat. No. LCA/LCH-498L.
Molecular Depot. Lens culinaris Lectin (LCA/LCH) – TRITC (Rhodamine). Catalog B2025553.
GlycoMatrix. Lens culinaris Lectin (LCA/LCH) - TRITC (Rhodamine). SKU 21761034-1.
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品,不参与保证任何实验,具体应用还需参考相关实验设计及文章!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)