Alexa Fluor 647 NHS Ester 介绍
Alexa Fluor 647 NHS Ester 是高性能远红荧光染料，属于 Alexa Fluor 系列。该系列染料因其高光稳定性、亮度高以及低背景干扰而被广泛应用于生命科学研究。Alexa Fluor 647 NHS Ester 特别适合用于蛋白质、抗体及其他含有初级氨基的生物分子的荧光标记和检测。其激发波长约为 650 nm，发射波长约为 668 nm，处于远红光谱段，因此在免疫荧光、多色成像和体内成像实验中具有显著优势。
化学结构与性质
Alexa Fluor 647 NHS Ester 的核心是 Alexa Fluor 647 荧光染料分子，末端带有 NHS 酯（N-hydroxysuccinimide ester）活性基团。NHS 酯是一种活化羧酸衍生物，能够在碱性条件下与生物分子中的初级氨基形成稳定的酰胺键。这种共价偶联保证了染料与蛋白质、抗体或肽的结合稳定性，并且不易脱落，从而保证荧光信号的可靠性和实验重复性。
与 carboxylic acid 形式的 Alexa Fluor 647 相比，NHS 酯形式更加便于直接偶联，尤其适用于快速标记和标准化实验方案。该染料为固体粉末，溶解于有机溶剂如 DMSO 或 DMF 后可直接用于偶联实验。
光学特性
Alexa Fluor 647 NHS Ester 的激发波长约为 650 nm，发射波长约为 668 nm，具有以下光学优势：
高量子产率：能够提供强烈的荧光信号，提高实验灵敏度。
远红光优势：远红光在组织中穿透力强，自体荧光干扰小，适合体内成像和厚组织成像。
优异光稳定性：经过分子优化设计，能够抵抗光漂白，适合长时间显微观察和多次扫描。
这些特性使 Alexa Fluor 647 NHS Ester 成为多色荧光实验和高分辨率成像的理想选择。
主要应用
蛋白质标记：通过 NHS 酯与蛋白质赖氨酸残基的共价结合，实现蛋白质荧光标记，适用于抗体、酶和受体等生物分子。
抗体偶联：可标记一级或二级抗体，用于免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）以及流式细胞术（FACS）实验。
细胞与组织成像：适用于荧光显微镜、共聚焦成像和小动物体内成像，信号强、噪声低。
多色实验：可与 Alexa Fluor 系列其他染料（如 Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555 等）联合使用，实现多通道共定位分析。
分子相互作用研究：可用于 FRET（荧光共振能量转移）实验，研究蛋白质-蛋白质或蛋白质-核酸相互作用。
使用注意事项
溶解性：Alexa Fluor 647 NHS Ester 粉末溶于 DMSO 或 DMF，避免在水中直接溶解以防 NHS 酯水解。
偶联条件：NHS 酯在碱性条件（pH 7.2–8.5）的缓冲液中与蛋白质氨基反应效率高。反应时间和染料与蛋白质摩尔比需根据实验需求优化。
储存条件：干粉应避光、低温（-20°C）干燥保存。溶解后的染料应短期避光使用，以防光漂白。
实验优化：过量染料可能影响蛋白质功能或结构，应通过实验优化染料与蛋白比例。
安全性：尽管毒性低，但操作时仍需佩戴手套和护目镜，避免直接接触或吸入。
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