Alexa Fluor 750-NHS 介绍
Alexa Fluor 750-NHS 是一种常用的荧光染料,属于 Alexa Fluor 系列荧光染料中的近红外(Near-Infrared, NIR)荧光染料。其激发和发射波长分别约为 749 nm 和 775 nm,因此在生物成像中具有显著的优势:近红外光波长穿透生物组织较深,且自体荧光干扰较低,适合用于体内成像、组织成像以及多重标记实验。Alexa Fluor 750-NHS 的 NHS 酯(N-hydroxysuccinimide ester)结构使其能够与含有初级氨基(如蛋白质的赖氨酸残基)反应,实现高效的共价偶联。
化学性质与结构特点
Alexa Fluor 750-NHS 的核心为高度稳定的荧光分子,带有 NHS 酯功能基团。NHS 酯是一种常用的活化羧酸衍生物,能够在碱性条件下(pH 7.2–8.5)与蛋白质、肽或其他含有氨基的生物分子形成稳定的酰胺键。这种共价偶联方式保证了染料与生物分子的稳定结合,避免在实验过程中发生解离或染料漂移。同时,Alexa Fluor 750 的分子结构经过优化,使其具有高量子产率和强的光稳定性,不易光漂白(photobleaching),适合长时间观测和高分辨率成像实验。

光学性质
Alexa Fluor 750 的激发和发射波长在近红外区(excitation ≈ 749 nm,emission ≈ 775 nm),这使其能够在组织深层成像中提供更高的信噪比(signal-to-noise ratio)。与可见光荧光染料相比,近红外染料自体荧光干扰小,并且在体内成像中穿透力更强。因此,Alexa Fluor 750-NHS 常用于动物体内荧光成像、深层组织标记以及多色成像实验,与其他 Alexa Fluor 系列可见光染料(如 Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594 等)结合,可以实现多通道荧光检测。
应用范围
蛋白质标记:通过 NHS 酯与蛋白质赖氨酸残基的共价结合,Alexa Fluor 750-NHS 可用于抗体、酶、受体蛋白等的荧光标记。
抗体偶联:在免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC)实验中,可将 Alexa Fluor 750-NHS 与二抗或一抗直接偶联,提高多色成像实验的灵活性。
细胞和组织成像:近红外荧光染料在体内成像中信号强、穿透深,可用于小动物成像和组织标记实验。
分子相互作用研究:可用于 FRET(荧光共振能量转移)实验,与适合的供体或受体荧光染料配对,实现分子相互作用的动态监测。
体外及体内实验:适用于流式细胞术(FACS)、荧光显微镜、近红外成像设备等。
使用注意事项
溶解性:Alexa Fluor 750-NHS 通常以干粉形式提供,可溶于 DMSO 或 DMF 等有机溶剂,避免在水中直接溶解以防 NHS 酯水解。
pH 条件:偶联反应在碱性缓冲液(pH 7.2–8.5)中效率高。过低或过高的 pH 都可能导致 NHS 酯水解或反应效率下降。
储存条件:干粉应保存在 -20°C 避光干燥处。溶解后的染料溶液应避光短期使用,避免长期保存。
反应摩尔比:标记蛋白质时通常需根据蛋白质浓度与 NHS 酯的活性进行优化,避免过量染料造成蛋白质功能丧失或染料聚集。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品,不参与保证任何实验,具体应用还需参考相关实验设计及文章!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)