CY5.5-HA MV:80000，菁染料cy5.5透明质酸 MV:80000
菁染料CY5.5标记透明质酸（CY5.5-HA），分子量（MV）为80000，是近红外荧光染料CY5.5与透明质酸（HA）通过共价偶联形成的荧光标记试剂，外观为浅蓝色至蓝紫色粉末，兼具CY5.5的近红外荧光特性与透明质酸的生物相容性、黏弹性及靶向性，主要用于生物医学科研领域的细胞成像、组织成像、药物递送追踪、肿瘤靶向研究等实验，严禁用于人体临床、诊断或治疗，仅作为科研试剂使用。本使用说明详细介绍其产品特性、使用方法、操作注意事项及储存条件，同时补充试剂的偶联特性、实验优化技巧及常见问题解决方案，帮助科研人员规范操作，提升实验效率与结果准确性。
产品核心特性方面，本品的荧光性能由CY5.5基团决定，激发波长约为680 nm，发射波长约为710 nm，处于近红外光区域，具有组织穿透力强、背景荧光低、荧光信号稳定的优势，可有效避免生物组织自身荧光的干扰，适合浅层及深层组织的体内外成像实验。透明质酸（HA）作为天然黏多糖，广泛存在于人体和动物组织中，具有良好的生物相容性、生物可降解性、无毒性，且能与细胞表面的CD44受体特异性结合，CD44受体在肿瘤细胞、炎症细胞表面高表达，因此本品可实现对肿瘤组织、炎症组织的靶向示踪，这也是其核心应用优势。分子量为80000的透明质酸属于中大分子HA，具有较好的黏弹性和水合能力，偶联CY5.5后，不仅保留了HA的生物学活性和靶向性，还可通过荧光信号实现对HA在生物体内的分布、代谢及靶向结合过程的精准追踪。此外，本品水溶性良好，可溶于生理盐水、PBS缓冲液等水性溶剂，无需使用有机溶剂，降低对生物体系的毒性影响，适合活细胞实验和活体成像实验。
使用前准备：
工作需充分，首先检查试剂外观，若出现结块、变色（非浅蓝色至蓝紫色）、吸潮严重或出现异味，说明试剂可能已变质，严禁使用。实验前需准备好相关实验器材，包括无菌离心管、移液枪、磁力搅拌器、0.22 μm滤膜、生理盐水、PBS缓冲液（pH 7.2-7.4）、近红外活体成像系统、荧光显微镜、细胞培养箱、透析袋等，所有器材需经无菌处理，避免污染试剂。同时，需根据实验类型（细胞靶向实验、活体成像实验、药物递送追踪实验）确定试剂用量，提前计算工作液浓度，建议进行预实验优化浓度，确保荧光信号清晰且不影响细胞活性或活体生理状态。
具体使用方法：
需结合实验类型调整，核心操作流程如下：第一步，配制工作液，取适量CY5.5-HA粉末，加入预冷的生理盐水或PBS缓冲液（pH 7.2-7.4），置于磁力搅拌器上轻柔搅拌15-20分钟，直至完全溶解，配制浓度为0.5-5 mg/mL的工作液，溶解后通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质和不溶物，过滤后的工作液需避光保存，现配现用。第二步，细胞靶向成像实验，选取高表达CD44受体的细胞（如HeLa细胞、A549细胞），接种于细胞培养皿中，培养至细胞汇合度达到70%-80%，去除原有培养基，加入配制好的CY5.5-HA工作液，工作液终浓度为0.1-1 mg/mL，37℃、5% CO₂细胞培养箱中孵育1-4小时，孵育结束后，用PBS缓冲液洗涤细胞3-4次，去除未结合的游离试剂，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜观察细胞内荧光分布，分析HA与CD44受体的结合情况。第三步，活体靶向成像实验，选取合适的动物模型（如肿瘤裸鼠模型），通过尾静脉注射将CY5.5-HA工作液导入动物体内，注射剂量为10-25 mg/kg，注射后不同时间点（1h、4h、8h、24h）用近红外活体成像系统检测，观察荧光信号在动物体内的分布，重点追踪肿瘤部位的荧光富集情况，分析靶向效果。第四步，药物递送追踪实验，将CY5.5-HA与药物载体结合，制备靶向药物递送系统，通过荧光信号追踪药物载体在体内的分布、代谢及肿瘤部位的富集情况，评估药物递送效率。
操作注意事项：
需严格遵循，确保实验安全与结果准确：一是避光操作，CY5.5基团对光敏感，试剂粉末、工作液及实验样本均需避光处理，操作过程中尽量在避光环境下进行，避免强光照射导致荧光漂白，影响荧光信号强度。二是无菌操作，所有与试剂接触的器材和实验环境均需无菌，避免微生物污染，若试剂不慎污染，需立即丢弃，不可继续使用；细胞实验中，工作液需过滤除菌，防止污染细胞。三是浓度控制，工作液浓度过高可能导致非特异性结合，过低则荧光信号微弱，需通过预实验确定较佳浓度；活体实验中，注射剂量需严格控制，过量可能导致HA在体内过度蓄积，影响实验动物的生理状态。四是靶向特异性验证，实验过程中需设置阴性对照组（如不表达CD44受体的细胞或正常动物组织），排除非特异性结合的干扰，确保实验结果的可靠性。五是安全操作，操作时需佩戴手套、口罩、护目镜，避免试剂接触皮肤、呼吸道和眼睛，若不慎接触，需立即用大量清水冲洗，必要时就医；实验结束后，妥善处理废弃试剂和耗材，符合实验室环保要求。
储存条件方面，未开封的CY5.5-HA MV:80000试剂，需置于-20℃避光、干燥、密封环境中保存，保质期为12个月，超过保质期后，需检测荧光强度和靶向结合活性，若荧光强度衰减超过30%或靶向活性明显下降，则不可使用；已开封的试剂，需密封后置于-20℃避光保存，尽量在1个月内用完，避免吸潮、氧化导致试剂变质。此外，试剂储存过程中需避免反复冻融，反复冻融会破坏CY5.5与HA的共价偶联键，导致荧光强度下降和靶向活性降低，若需分多次使用，可将试剂分装成小份，单次使用一份，剩余部分立即冷冻保存。
补充说明：本品分子量为80000，属于中大分子透明质酸，其黏弹性和靶向性优于小分子HA，适合用于肿瘤靶向成像、药物递送追踪等研究，与小分子CY5.5-HA（分子量<10000，适合组织渗透研究）形成区分，科研人员需根据实验需求选择合适分子量的产品。实验过程中，若出现荧光信号富集不明显，可适当延长孵育时间或提高工作液浓度；若出现非特异性荧光，可增加洗涤次数，或加入过量未标记HA封闭CD44受体，排除干扰。同时，本品可与其他荧光标记试剂（如FITC标记试剂）搭配使用，实现多色荧光成像，助力更复杂的实验研究。
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