Cy5.5 标记菊粉（Cy5.5-Inulin）使用指南
Cy5.5-Inulin，是近红外荧光染料 Cy5.5 与天然多糖菊粉通过共价偶联形成的功能性荧光探针，激发波长约 675 nm，发射波长约 695 nm，具备低背景、高灵敏度、组织穿透性强等优势，适用于体外细胞实验、体内成像及药物递送研究等场景。为保障实验准确性与重复性，我们制定本指南，助力科研人员高效使用该产品。
一、产品基本信息
项目 |
详情 |
外观 |
蓝色粉末（冻干粉） |
纯度 |
≥95%（HPLC、荧光光谱双重验证） |
溶解性 |
易溶于 PBS、生理盐水等水性缓冲液 |
储存条件 |
-20℃避光干燥保存，避免反复冻融 |
二、操作流程
（一）试剂准备
复溶：取 Cy5.5-Inulin 冻干粉，加入无菌去离子水或 PBS（pH 7.2-7.4），配制成 1-10 mg/mL 储备液，轻轻混匀，室温静置 5-10 分钟至完全溶解，避免剧烈振荡。
稀释：根据实验需求，用培养基或相应缓冲液将储备液稀释至工作浓度（体外实验常用 0.1-1 μM，体内成像常用 1-5 mg/kg）。
过滤：稀释后溶液经 0.22 μm 滤膜过滤，去除杂质，防止污染。
（二）体外细胞实验
细胞培养：将对数期细胞接种于培养板，培养至汇合度达 70%-80%。
加样：吸弃旧培养基，加入含 Cy5.5-Inulin 的新鲜培养基，37℃、5% CO₂培养箱孵育 0.5-4 小时（具体时间根据细胞类型优化）。
洗涤：孵育结束后，用 PBS 洗涤细胞 3 次，去除未结合的探针。
检测：通过荧光显微镜、流式细胞仪等检测，激发波长 675 nm，发射波长 695 nm。
（三）体内成像实验
动物准备：选取健康小鼠等实验动物，称重并标记。
给药：通过尾静脉注射、腹腔注射等方式给药，剂量 1-5 mg/kg，注射体积根据动物体重调整。
成像：给药后不同时间点（如 1、3、6、24 小时），使用小动物活体成像系统检测，设置激发 675 nm、发射 695 nm，采集荧光信号。
数据分析：利用成像软件分析荧光强度、分布区域等参数。
（四）成像注意事项
荧光稳定性：Cy5.5-Inulin 荧光信号在近红外区稳定，但长时间光照易发生光漂白，成像时缩短曝光时间，或添加抗淬灭剂。
背景控制：体内实验可设置空白对照组（仅注射缓冲液），体外实验设置未加探针的细胞对照组，扣除背景荧光。
三、关键要点与问题解决
标记效率验证：通过 UV-Vis 吸收光谱检测 Cy5.5 特征吸收峰（675 nm），或荧光光谱检测发射峰（695 nm），计算标记效率。
常见问题及对策
溶解不完全：适当提高温度（≤37℃），或延长静置时间，避免超声处理导致分子结构破坏。
荧光信号弱：检查探针浓度是否过低，或孵育时间不足，可优化浓度和时间；排查是否存在非特异性结合，增加洗涤次数。
细胞毒性：降低探针浓度或缩短孵育时间，必要时更换细胞系。
四、安全与环保
操作时佩戴手套、口罩，避免皮肤接触和吸入粉末。
实验废弃物按生物安全规范处理，染料废液需单独收集，交由专业机构处置。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品，不参与保证任何实验，具体应用还需参考相关实验设计及文章！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
