FITC-苯并二氢呋喃二酮 FITC-Benzodihydrofuran-dione的荧光探针构建及抗氧化活性体外可视化筛选

FITC-苯并二氢呋喃二酮 FITC-Benzodihydrofuran-dione的荧光探针构建及抗氧化活性体外可视化筛选

苯并二氢呋喃二酮类化合物是一类具有潜在抗氧化活性的天然产物衍生物，其可通过捕获体内过量的活性氧自由基（ROS），减轻氧化应激损伤，在抗衰老、抗炎及神经退行性疾病治疗等方面具有广阔的应用前景。构建基于该类化合物的荧光探针，可实现抗氧化活性的体外可视化筛选，提高筛选效率和准确性。本研究以苯并二氢呋喃二酮为母体，通过化学偶联法与FITC结合，构建FITC-苯并二氢呋喃二酮荧光探针，并探究其在抗氧化活性体外可视化筛选中的应用。

荧光探针的构建过程如下：

首先对苯并二氢呋喃二酮进行氨基化修饰，引入活性氨基基团，随后将FITC的异硫氰酸酯基团与氨基发生亲核加成反应，形成稳定的硫脲键，经柱层析纯化和HPLC鉴定，获得纯度大于95%的FITC-苯并二氢呋喃二酮探针。对探针的荧光特性进行检测，结果显示其在PBS缓冲液中激发波长为495nm，发射波长为525nm，荧光量子产率为0.68，具有良好的荧光稳定性。

抗氧化活性体外可视化筛选实验分为两个部分：

一是体外自由基清除能力检测，将不同浓度的探针与DPPH自由基或ABTS自由基共孵育，通过荧光分光光度计检测荧光信号变化。结果显示，随着探针浓度的增加，荧光信号逐渐增强，且与自由基清除率呈良好的线性关系，表明该探针可通过捕获自由基使荧光信号增强，实现对自身抗氧化活性的可视化检测，其DPPH自由基清除率IC50值为25.3μmol/L，ABTS自由基清除率IC50值为18.7μmol/L，具有较强的自由基清除能力。

二是细胞氧化应激模型中的抗氧化活性评估，将H2O2诱导的氧化应激细胞模型与探针共孵育后，通过激光共聚焦显微镜观察细胞内荧光信号。结果显示，氧化应激细胞内荧光信号显著增强，且随着探针浓度的增加，荧光强度逐渐升高，同时细胞内ROS水平明显降低，表明该探针可进入细胞内发挥抗氧化作用，且荧光信号强度可直观反映其抗氧化效果。

本研究构建的FITC-苯并二氢呋喃二酮荧光探针具有良好的荧光特性和抗氧化活性，可实现抗氧化活性的体外可视化筛选，为苯并二氢呋喃二酮类化合物的进一步开发和应用提供了重要的工具和实验依据，同时也为抗氧化剂的高效筛选提供了新的技术思路。

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