中英文名称：FITC-Polylysine（FITC标记聚赖氨酸）
波长：激发波长490nm，发射波长520nm
项目 |
参数 |
标记率 |
≥90% |
分子量范围 |
3kDa-30kDa（可定制） |
纯度 |
≥95% |
溶解性 |
易溶于水、PBS缓冲液 |
描述：
FITC-Polylysine（FITC标记聚赖氨酸）是将荧光素异硫氰酸酯（FITC）与聚赖氨酸通过共价结合形成的荧光探针。聚赖氨酸是一种具有良好生物相容性、阳离子特性的天然多肽，FITC则是一种常用的荧光染料，具有荧光强度高、稳定性好等优点。该产品广泛应用于细胞成像、生物传感、药物递送等领域。以下将详细介绍其合成工艺及表征方法。
合成工艺：FITC-Polylysine的合成主要采用溶液相合成法，具体步骤如下：第一步，原料预处理。选取分子量符合要求的聚赖氨酸盐酸盐，用去离子水溶解，配制成浓度为5-10mg/mL的聚赖氨酸溶液。将FITC粉末用少量二甲基亚砜（DMSO）溶解，配制成浓度为1-2mg/mL的FITC溶液，DMSO的用量应控制在总体积的5%以下，避免影响聚赖氨酸的溶解性。第二步，标记反应。将聚赖氨酸溶液置于三颈烧瓶中，加入适量的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH=9.0），调节溶液pH值至8.5-9.0，该pH值有利于FITC的异硫氰酸酯基团与聚赖氨酸的氨基发生反应。在磁力搅拌下，将FITC溶液缓慢滴加到聚赖氨酸溶液中，FITC与聚赖氨酸的摩尔比控制在1:5-1:10，滴加完毕后，在室温下避光搅拌反应8-12小时。第三步，产物纯化。反应结束后，将反应液转移至透析袋（截留分子量为1kDa）中，用去离子水进行透析纯化，透析过程中更换去离子水3-4次，每次更换间隔4-6小时，以去除未反应的游离FITC和DMSO。透析完成后，将透析袋内的溶液进行冷冻干燥，得到FITC-Polylysine粉末产品。
优化后的合成工艺可有效提高标记率和产品纯度。在反应过程中，严格控制pH值和反应温度是关键，pH值过高会导致FITC发生水解，降低标记效率；温度过高则可能导致聚赖氨酸分子链降解。此外，避光反应可防止FITC发生光降解，保证荧光性能。在纯化过程中，选择合适截留分子量的透析袋可有效去除游离FITC，若需要进一步提高纯度，可采用凝胶过滤层析进行二次纯化。
表征方法：一是标记率测定。采用紫外-可见分光光度计进行测定，FITC在490nm处有特征吸收峰，聚赖氨酸在280nm处有特征吸收峰。通过测定样品在490nm和280nm处的吸光度，根据朗伯-比尔定律计算FITC和聚赖氨酸的浓度，进而计算标记率。标记率=（FITC的摩尔数/聚赖氨酸的摩尔数）×100%。二是分子量及分子量分布测定。采用凝胶渗透色谱（GPC）进行测定，以水相凝胶柱为分离柱，以0.1mol/L的氯化钠溶液为流动相，流速为0.5mL/min，柱温为30℃。以不同分子量的聚乙二醇为标准品，绘制标准曲线，通过GPC图谱计算FITC-Polylysine的数均分子量、重均分子量及分子量分布指数。三是荧光性能表征。采用荧光分光光度计测定样品的激发光谱和发射光谱，确定激发波长和发射波长，并测定荧光量子产率。荧光量子产率的测定以硫酸奎宁为标准物质（量子产率=0.546），通过比较样品和标准物质的荧光强度、吸光度计算得到。
四是纯度测定。采用高效液相色谱（HPLC）进行测定，以C18色谱柱为分离柱，以乙腈-水（含0.1%三氟乙酸）为流动相，进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，检测波长为490nm。通过HPLC图谱的峰面积归一化法计算产品纯度，纯度≥95%为合格。五是结构表征。采用傅里叶变换红外光谱（FT-IR）进行测定，将样品与溴化钾混合压片，扫描范围为4000-400cm⁻¹。通过分析红外光谱图中的特征吸收峰，确认FITC与聚赖氨酸之间是否形成了共价键，如酰胺键的特征吸收峰（1650cm⁻¹左右）。此外，还可采用核磁共振氢谱（¹H-NMR）进行结构表征，进一步验证标记反应的成功与否。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
