BODIPY-W4 645/660的使用说明
BODIPY-W4 645/660是一种性能优异的近红外荧光染料，隶属于BODIPY（硼二吡咯亚甲基）染料家族，其激发波长为645nm，发射波长为660nm，具有光稳定性强、荧光量子产率高、背景干扰低等显著优势，广泛应用于细胞成像、脂质检测、活体示踪等生物医学研究领域。
以下是其详细使用说明：
首先是前期准备工作。溶剂选择方面，由于BODIPY-W4 645/660在水溶液中溶解度有限，需先使用 DMSO（二甲基亚砜）或无水乙醇等有机溶剂进行预溶解，制备浓度为1-10 mM的储备液。建议选择高纯度溶剂，避免杂质影响荧光信号。储备液配制完成后，需立即分装至无菌离心管中，每管体积根据实验需求确定，避免反复冻融导致染料活性下降。储存条件为-20℃避光保存，同时加入干燥剂防止受潮，未开封的储备液保质期通常为6个月，开封后建议1个月内用完。
样品处理需根据样品类型差异化操作。对于活细胞染色，先将细胞接种于共聚焦培养皿中，培养至汇合度达到70%-80%时进行实验。实验前用预热至37℃的PBS缓冲液洗涤细胞2-3次，去除培养基中的血清成分，避免非特异性结合。随后根据实验需求，将储备液用无血清培养基稀释至工作浓度0.1-2 μM，加入培养皿中，在37℃、5% CO₂培养箱中孵育15-30分钟。孵育结束后，用PBS缓冲液洗涤细胞3次，每次5分钟，以去除未结合的游离染料。对于固定细胞或组织切片，需先进行固定和通透处理（固定液推荐4%多聚甲醛，通透液推荐0.1% Triton X-100），洗涤干净后，将染料工作浓度调整为0.5-5 μM，室温避光孵育30-60分钟，后续用PBS充分洗涤。若用于脂质滴或脂肪细胞染色，工作浓度可适当提高至1-3 μM，孵育时间延长至30分钟，确保染料充分渗透至脂质结构中。
成像与检测环节，需根据染料的光学特性设置仪器参数。共聚焦显微镜的激发光源选择645nm激光，发射滤光片选择660nm通道，避免与其他荧光染料的信号重叠。成像过程中需保持样品处于避光环境，防止荧光淬灭。若进行定量分析，需设置统一的曝光时间、增益等参数，确保实验结果的可重复性。使用流式细胞仪检测时，激发波长设置为645nm，发射波长检测通道为660/20 nm，检测前需用未染色细胞设置阴性对照，调整电压阈值排除背景噪音。
注意事项方面，操作全程需严格避光，尤其是染料溶液制备和样品孵育阶段，强烈光照会导致荧光信号衰减。实验过程中需佩戴手套和防护眼镜，避免染料接触皮肤和黏膜。不同细胞类型对染料的耐受性不同，首次使用需通过预实验优化工作浓度和孵育时间，避免浓度过高导致细胞毒性。若实验中需要与其他荧光染料共染，需确保各染料的激发和发射波长无重叠，推荐与488nm激发的荧光染料（如FITC）搭配使用。实验结束后，含染料的废液需集中收集，按照化学危险品处理规范进行处置，避免环境污染。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证,限参考。我方仅提供相关产品，不参与保证任何实验，具体应用还需参考相关实验设计及文章！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
