罗丹明-异银杏双黄酮（RB-Isoginkgetin）使用指南
1. 化合物基础信息
罗丹明-异银杏双黄酮（RB-Isoginkgetin）是将罗丹明（RB）荧光基团与异银杏双黄酮通过共价键连接形成的探针分子，分子量约为 780-800 Da，水溶性中等（约 5-10 mg/mL，PBS 缓冲液），荧光发射波长为 570-590 nm，激发波长为 540-560 nm，量子产率 0.85-0.90，具有良好的光稳定性和生物相容性。异银杏双黄酮作为天然黄酮类化合物，本身具有、抗氧化及肿瘤细胞抑制活性，罗丹明标记后可实现对其在生物体内的靶向定位、代谢追踪及作用机制研究，广泛应用于细胞生物学、药理学及活体成像研究。
2. 试剂准备与储存
试剂准备：使用前需将 RB-Isoginkgetin 粉末置于室温平衡 30 分钟，避免因温度差异导致吸潮。推荐溶剂选择：优先使用二甲基亚砜（DMSO）溶解，配制成 10 mM 母液（精确称取 8.0 mg 粉末，加入 100 μL DMSO，涡旋振荡 5 分钟至完全溶解），随后用无血清培养基或 PBS 缓冲液（pH 7.2-7.4）稀释至实验所需浓度（工作浓度通常为 0.1-10 μM），稀释后需在 2 小时内使用，避免荧光淬灭或化合物降解。若需用于活体实验，可采用生理盐水稀释，添加 5% 聚乙二醇（PEG 400）提升水溶性，降低团聚风险。
储存条件：未开封的 RB-Isoginkgetin 粉末需密封置于-20℃冰箱，避光、干燥保存，保质期 12 个月。已配制的 DMSO 母液需分装为 10-20 μL / 管，避免反复冻融，-80℃避光保存，可稳定 3 个月；稀释后的工作液不可储存，需现配现用。储存期间需避免接触强氧化剂、强酸强碱，严禁长时间暴露于自然光或紫外线下。
3. 实验操作流程
细胞实验：① 细胞接种：将对数生长期的目标细胞（如肿瘤细胞、内皮细胞）以 5×10⁴个 / 孔密度接种于 24 孔板，加入含 10% 胎牛血清的培养基，37℃、5% CO₂培养箱中孵育 24 小时，待细胞融合度达 70%-80%；② 探针孵育：吸弃旧培养基，PBS 缓冲液洗涤细胞 2 次，加入含 RB-Isoginkgetin 工作液（0.5-5 μM）的无血清培养基，继续孵育 1-4 小时（根据细胞类型优化孵育时间，肿瘤细胞推荐 2 小时）；③ 洗涤与固定：孵育结束后，用 PBS 洗涤 3 次，每次 5 分钟，去除未结合的游离探针；若需荧光成像，可直接加入新鲜培养基进行活细胞成像；若需固定，加入 4% 多聚甲醛溶液室温固定 15 分钟，PBS 洗涤后加入 DAPI 染核 5 分钟，再次洗涤后封片；④ 检测分析：通过激光共聚焦显微镜（激发波长 550 nm，发射波长 580 nm）观察荧光分布，或采用流式细胞仪定量检测细胞内荧光强度，分析探针的细胞摄取效率及靶向性。
活体成像实验：① 动物准备：选取 6-8 周龄 Balb/c 裸鼠或 C57BL/6 小鼠，建立相应疾病模型（如肿瘤移植模型、炎症模型），实验前禁食 12 小时，自由饮水；② 探针给药：通过尾静脉注射 RB-Isoginkgetin 工作液（剂量 5-10 mg/kg，体积 100 μL / 只），或根据实验需求采用腹腔注射（剂量 10-15 mg/kg）；③ 成像检测：给药后不同时间点（1、3、6、12、24 小时）将小鼠置于活体荧光成像系统中，设置激发波长 550 nm，发射波长 580 nm，曝光时间 1-5 秒，采集荧光图像，分析探针在体内的分布、靶向组织富集情况及代谢动力学；④ 样本处理：成像结束后，可处死小鼠，分离心、肝、脾、肺、肾、靶向组织（如肿瘤）等器官，进行体外荧光成像或组织切片荧光染色，进一步验证探针的组织分布特异性。
4. 注意事项与 troubleshooting
注意事项：① 操作时需佩戴一次性手套、口罩及防护眼镜，避免探针接触皮肤和黏膜，若不慎接触，需立即用大量清水冲洗；② 荧光实验全程需避光操作，包括试剂配制、孵育、洗涤等步骤，可使用锡箔纸包裹容器，减少荧光淬灭；③ 细胞实验中，DMSO 终浓度需控制在 0.1% 以下，避免对细胞造成毒性；活体实验中，给药后需密切观察动物状态，若出现异常反应需及时处理；④ 激光共聚焦成像时，需合理调节激光强度和曝光时间，避免荧光漂白，同时设置空白对照组（未加探针的细胞 / 动物）排除自发荧光干扰。
常见问题解决：① 荧光强度弱：可能是探针浓度过低、孵育时间不足或细胞摄取效率低，可适当提高工作浓度（不超过 10 μM）、延长孵育时间至 4 小时，或优化细胞培养条件（如提高细胞活性）；② 非特异性荧光强：可能是未结合的游离探针未洗净，需增加 PBS 洗涤次数（4-5 次），或降低探针工作浓度；③ 细胞毒性明显：可能是 DMSO 浓度过高或探针浓度过高，需降低 DMSO 终浓度（≤0.1%），并通过 MTT 实验筛选优选无毒浓度；④ 活体成像信号不稳定：可能是探针在体内团聚，可在工作液中添加适量 PEG 400 或吐温 80，或优化给药方式（如尾静脉注射改为缓慢推注）。
5. 应用场景与结果分析
RB-Isoginkgetin 主要应用于黄酮类化合物的生物活性研究，包括：① 肿瘤靶向研究：利用异银杏双黄酮对肿瘤细胞的特异性结合能力，通过荧光成像追踪探针在肿瘤组织的富集情况，评估其靶向治疗潜力；② 机制研究：观察探针在炎症部位的分布，结合细胞因子检测，分析异银杏双黄酮的作用靶点；③ 药物代谢动力学研究：通过活体成像定量分析探针在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，为药物研发提供数据支持。
结果分析时，需结合荧光强度、分布区域及时间变化曲线：① 细胞实验中，若靶向细胞的荧光强度显著高于正常细胞，表明探针具有良好的细胞靶向性；② 活体实验中，若靶向组织（如肿瘤）的荧光信号在给药后 3-6 小时达到峰值，且持续时间超过 12 小时，说明探针具有理想的体内靶向性和代谢稳定性；③ 结合 Western blot、RT-PCR 等技术，可进一步验证探针介导的生物效应（如肿瘤细胞凋亡、炎症因子表达下调等），全面解析异银杏双黄酮的作用机制。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
