罗丹明标记亲和素 Rhodamine-Avidin的使用说明
描述：
罗丹明标记亲和素（Rhodamine-Avidin）是一种将荧光染料罗丹明（Rhodamine）与高亲和力蛋白亲和素（Avidin）通过化学键结合形成的荧光生物探针。该复合物兼具罗丹明的强荧光特性与亲和素对生物素（Biotin）的超高亲和结合能力，可广泛应用于免疫荧光染色、细胞成像、核酸或蛋白检测、以及生物芯片信号标记等研究领域。其使用简便、信号稳定、特异性高，是目前常用的荧光标记工具之一。
罗丹明标记亲和素一般为冻干粉或溶液形式保存。若为冻干粉，使用前可用适量的PBS缓冲液（pH 7.4）或无菌去离子水复溶，通常浓度设定为0.1–1 mg/mL，复溶后需轻轻混匀，避免剧烈振荡造成蛋白变性。溶液应分装保存，短期可置于4°C避光条件下保存，长期保存建议在–20°C或–80°C冷冻并避免反复冻融，以防荧光信号减弱及蛋白活性下降。实验操作应尽量在避光环境中进行，防止罗丹明荧光基团光漂白。
一、中文名称：罗丹明标记亲和素
英文名称：Rhodamine-labeled Avidin 或 Rhodamine-Avidin
别名：罗丹明亲和素、罗丹明荧光标记亲和素、Rhodamine-conjugated Avidin
二、化学及物理性质
组成结构：由天然或重组来源的亲和素（Avidin）与荧光染料罗丹明（Rhodamine）通过共价键结合形成的复合物。
蛋白来源：亲和素通常来源于鸡卵白，是一种四聚体糖蛋白，能够与生物素（Biotin）以极高亲和力（Kd ≈ 10⁻¹⁵ M）形成稳定复合物。
分子量：约66 kDa（四聚体形式）。
外观性状：红橙色冻干粉末或红色透明溶液。
溶解性：可溶于PBS、TBS或其他中性缓冲溶液。
pH 稳定范围：6.5–8.0。
三、荧光特性：
激发波长（Ex）：约540–560 nm
发射波长（Em）：约570–590 nm
发射颜色：橙红色荧光
兼容仪器：荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪等
四、罗丹明标记亲和素的用途：
在免疫荧光标记或细胞成像实验中，常使用罗丹明标记亲和素与生物素化抗体或生物素化探针配合使用。实验时，先将样品与生物素标记的一抗或探针孵育，使目标分子被特异识别并结合。然后加入适量的罗丹明标记亲和素溶液（一般推荐稀释比例为1:200～1:1000，视样品与显微镜灵敏度而定），在室温避光条件下孵育20–30分钟。孵育完成后，用PBS缓冲液充分洗涤3次，以去除未结合的荧光复合物，减少背景信号。
在应用中，罗丹明的激发波长通常在540–560 nm之间，发射峰在570–590 nm范围内，适用于常规荧光显微镜、共聚焦显微镜或流式细胞仪检测。其发射为明亮的橙红色荧光，穿透能力较好，能清晰标记细胞膜、细胞核或胞质中的靶标分布。对于组织切片或固定细胞实验，建议使用含有抗荧光淬灭剂的封片剂封片，以延长观察时间并保持信号强度。
在核酸探针杂交实验、ELISA或生物芯片检测中，罗丹明标记亲和素可作为荧光信号放大系统使用。通过其与生物素-标记核酸或蛋白的结合，可将荧光信号放大数倍，提高检测灵敏度和特异性。例如，在生物素标记的寡核苷酸探针杂交后，加入罗丹明标记亲和素即可实现目标序列的可视化检测。此外，该标记物也适用于免疫印迹（Western blot）中作为检测信号的替代方案，尤其在需要进行多重荧光检测时表现出良好的光谱分离性。
注意事项方面，使用罗丹明标记亲和素时应确保样品无游离生物素存在，否则会竞争结合亲和素并造成信号下降。若样品处理步骤中使用了含生物素的培养基或试剂，应充分清洗或更换无生物素体系。罗丹明分子具有一定的光敏性，操作过程中应尽量减少强光照射，并在荧光显微观察后尽快采集图像。
综上，罗丹明标记亲和素是一种兼具高特异性与优良荧光性能的生物探针，适用于多种免疫与分子生物学实验。其使用步骤简便，信号清晰稳定，是研究细胞定位、蛋白相互作用、核酸杂交及荧光示踪等实验的重要工具。在规范储存与避光操作条件下，罗丹明标记亲和素可长期保持活性与荧光强度，为生物成像和分子识别提供可靠手段。
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