CY3 - 透明质酸（CY3-Hyaluronate, CY3-HA）是通过可见光荧光染料 CY3 与透明质酸（Hyaluronic Acid, HA）共价偶联形成的靶向荧光探针，整合了透明质酸的肿瘤微环境靶向性与 CY3 的高亮度荧光示踪能力。
利用 CD44 高表达特性实现精准定位：
· 活体荧光成像：在 4T1 乳腺癌小鼠模型中，尾静脉注射 100 kDa CY3-HA 后 4 小时，肿瘤部位荧光信号 / 肌肉比（T/M）达 15:1，清晰显示直径＜500 μm 的转移灶，较传统 Cy3 标记抗体提升 3 倍信噪比。手术导航实验中，近红外手术显微镜下肿瘤边界识别准确率达 92%（与病理切片对照）。
· 流式细胞术分选：标记后 HA 与 CD44⁺肿瘤干细胞（如脑肿瘤侧群细胞）的结合效率＞95%，流式分选纯度＞98%，为肿瘤干细胞干性研究提供纯细胞样本。
实时监测 ECM 重塑过程，揭示肿瘤侵袭机制：
· 3D 基质成像：共聚焦显微镜下，CY3-HA 标记的胶原 - 透明质酸水凝胶显示 HA 纤维网络结构（纤维直径 50-100 nm），成纤维细胞迁移路径与 HA 降解区高度重合（共定位系数 0.88），证实 HA 降解促进细胞侵袭。
· 活体基质示踪：在结肠炎小鼠模型中，CY3-HA 荧光信号与炎症部位 HA 沉积量呈正相关（R²=0.91），动态追踪黏膜修复过程中 HA 的合成与降解动态（时间分辨率 24 小时）。
HA 作为天然载体材料提升递送效率：
· 化疗药物负载：通过疏水相互作用负载阿霉素（DOX），构建的 CY3-HA-DOX 纳米颗粒（粒径 150±20 nm）在肿瘤细胞内药物释放效率（pH 6.5 时 24 小时释放 85%）比游离 DOX 高 3 倍，荷瘤小鼠肿瘤抑制率提升至 80%（vs 游离 DOX 组 50%）。
· 基因递送载体：与 siRNA 复合形成聚电解质复合物，CY3 荧光实时监测其在肝脏的富集效率比裸 siRNA 高 4 倍，流式细胞术显示肝细胞转染效率达 70%，有效沉默 CD44 基因表达达 60%。
靶向异常 HA 沉积部位，辅助疾病分期：
· 关节炎模型：膝关节腔注射 CY3-HA 后 2 小时，炎症滑膜荧光信号强度比正常关节高 5 倍，与 MRI T2 加权像的滑膜增厚区域重合度＞90%，可定量评估炎症活动度（荧光强度与 IL-6 水平正相关，r=0.89）。
· 肝纤维化检测：尾静脉注射后，CY3-HA 在肝纤维化病灶的富集量随纤维化分期（S0-S4）递增，弹性成像与荧光信号的相关性分析可实现非侵入性肝纤维化分级（准确率 91%）。
HA 活化：
· 透明质酸溶于 MES 缓冲液（pH 6.5），加入 EDC/NHS（摩尔比 HA-COOH:EDC:NHS=1:2:2），室温活化 30 分钟，HPLC 检测活化率＞95%，获得活性酯中间体。
CY3 偶联：
· CY3-NH₂与活化 HA 在 pH 8.0 PBS 中反应，染料 / HA 摩尔比 5:1，室温振荡 2 小时，通过凝胶过滤层析（Sephadex G-200）去除游离染料，得到 CY3-HA，标记率通过 UV-Vis 计算（A₂₈₀/A₅₅₅比值），CD44 结合活性通过 ELISA 验证。
· 标记均一性：SDS-PAGE 荧光扫描显示单一标记条带，避免多聚体形成（高分子量杂质＜5%）；动态光散射（DLS）测定粒径分布 PDI＜0.15，确保体内分布均一。
· 靶向活性：竞争结合实验中，10 μM CY3-HA 可抑制 90% 以上的 ³H 标记 HA 与 CD44 结合，证实标记未显著影响 HA 的受体亲和力。
· 荧光纯度：HPLC 检测游离 CY3 残留＜2%，避免背景干扰；荧光显微镜观察标记 HA 在 CD44⁺细胞表面呈均匀膜分布，无明显聚集。
产品名称 |
分子量 |
标记率 |
包装规格 |
CY3-HA (100kDa) |
100 kDa |
2% |
5mg/25mg |
CY3-HA (500kDa) |
500 kDa |
3% |
50mg/100mg |
· 细胞孵育：HeLa 细胞（CD44⁺）与 50 μg/mL CY3-HA 共孵育 30 分钟，4℃（抑制内吞）或 37℃（促进内吞）。
· 检测方法：流式细胞仪 FL2 通道检测，37℃组平均荧光强度（MFI）比 4℃组高 8 倍，证实 CD44 介导的内吞作用；共聚焦显微镜显示荧光信号与 CD44 抗体染色共定位系数达 0.92。
· 探针配制：20 mg CY3-HA（100 kDa）溶于 2 mL PBS，0.22 μm 滤膜除菌，尾静脉注射小鼠（剂量 20 mg/kg）。
· 成像参数：4 小时后置于 IVIS Spectrum 系统，激发滤光片 540/20 nm，发射滤光片 575/20 nm，曝光时间 200 ms，Living Image 软件分析 T/M 值及肿瘤 CD44 表达相关性（免疫组化验证 R²=0.95）。
分子量依赖性：大分子量 HA（＞500 kDa）难以穿透肿瘤血管壁（平均孔径 100-500 nm），需开发酶响应性 HA（如修饰透明质酸酶可降解片段），提升肿瘤深部渗透效率（目前 100 kDa HA 穿透深度约 80 μm，需提升至 200 μm 以上）。
非特异性结合：正常组织（如滑膜、淋巴结）的 CD44 低表达导致背景信号，需偶联肿瘤特异性配体（如 RGD 肽）构建双靶向探针，使 T/M 比从 15:1 提升至 30:1 以上。
荧光信号衰减：CY3 在体内存在光漂白（每小时衰减 15%），需结合荧光增强型纳米载体（如二氧化硅包载）或切换至近红外染料（如 CY5-HA），提升信号稳定性与组织穿透深度。
智能响应型探针：引入 pH 敏感腙键连接 CY3 与 HA，在肿瘤微酸性环境（pH 6.5）释放 CY3，荧光强度增强 60%，同时触发 HA 降解释放负载药物（如顺铂前药），实现 “靶向富集 - 环境响应 - 协同治疗” 一体化，体外实验显示药物释放效率＞90%。
多模态靶向系统：与 MRI 造影剂（如 Gd-DTPA）偶联，制备 CY3-HA-Gd 双模态探针，同步实现可见光荧光成像（细胞层面定位）与 T1 加权 MRI（解剖结构），肿瘤定位误差＜50 μm，适用于术前精准分期。
临床转化预研：开展 CY3-HA 在卵巢癌患者中的术中导航研究，利用其 CD44 靶向性与高亮度荧光，实现微小病灶（＜1 mm）的实时识别，目前在猪模型中已完成安全性验证，荧光信号对比度达 10:1。
CY3 - 透明质酸凭借透明质酸的肿瘤微环境靶向性、生物相容性及 CY3 的高分辨荧光示踪能力，成为肿瘤诊断、基质研究及药物递送的创新工具。随着糖胺聚糖化学、荧光标记技术与精准医疗的深度融合，该探针正从基础研究试剂向临床可视化诊疗的关键材料演进，为肿瘤精准切除、纤维化疾病评估及靶向药物开发提供全新策略。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
