CY3-LPS是脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS) 通过化学方法与花菁染料3(Cyanine 3, CY3) 共价偶联后形成的复合物。CY3作为一种明亮的橙黄色荧光染料,具有光稳定性好、荧光量子产率高的优点。
标记后的LPS保留了其生物活性,同时可以被荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备所追踪。
CY3-LPS的制备:
CY3-LPS的制备通常需要通过化学修饰的方法,将CY3染料共价连接到LPS分子上。LPS分子上的氨基或羟基可以作为连接位点。
连接方法可能包括使用活化酯、异硫氰酸酯等化学试剂,使CY3染料与LPS分子形成稳定的共价键。
应用
CY3-LPS主要用于可视化和定量分析LPS与细胞的相互作用:
细胞吞噬作用研究:实时成像免疫细胞对LPS的吞噬过程。
内化途径追踪:研究LPS被细胞摄取后的胞内运输路径。
TLR4受体结合与内化:观察LPS与细胞表面TLR4/MD2受体复合物结合后的命运。
屏障通透性研究:利用CY3-LPS研究上皮或内皮细胞屏障对细菌产物的通透性。
注意事项与局限性
生物活性:关键点! 标记过程可能改变LPS的生物活性。化学修饰可能影响其聚集状态以及与TLR4受体的结合效率。因此,在重要实验中,必须设置功能对照,以确认其仍具有免疫刺激性。
聚集状态:LPS在水溶液中容易形成聚集体(Micelles),其聚集状态严重影响其生物活性和细胞摄取方式。
内化 vs. 表面结合:细胞表面的荧光信号可能来自已经与受体结合但尚未内化的LPS。
替代方案
其他荧光染料标记:除了CY3,LPS也常被标记为FITC(绿色)、CY5(远红色)或Alexa Fluor系列染料,以适应多色荧光实验的需要。
生物素标记:使用生物素(Biotin)标记的LPS,然后通过荧光标记的链霉亲和素进行间接检测。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)