Cy3 NHS Ester 是什么?
Cy3 NHS Ester 是一种花菁荧光染料,用于共价标记生物分子。
Cy3 (Cyanine 3)一种合成荧光染料,属于花菁素(Cyanine)家族。
其激发波长~540 nm,发射波长~560 nm,发出明亮的橘黄色荧光。具有高荧光强度、良好的光稳定性和水溶性。
科研中的应用:如何用它来标记分子?
Cy3 NHS Ester 主要用于标记蛋白质、抗体、肽段、氨基修饰的寡核苷酸(DNA/RNA)。
存储要求
Cy3 NHS Ester 对水分和光极其敏感,因此储存条件非常严格。
形态:固体粉末。
温度:-20°C 以下避光保存。
防潮:固体粉末务必保持干燥。从冰箱取出后,需在室温下平衡至少15-20分钟再打开瓶盖,防止水汽冷凝进入瓶内导致染料水解失效。
避光:所有操作和储存都必须在避光条件下进行(例如使用琥珀色管或用铝箔纸包裹)。
溶液:如果用DMSO配制成了储存液,建议现配现用,避免溶解后存储。
常见问题解答
问: 为什么我的标记效率很低?
答:常见的原因是:
pH不对:反应体系不是碱性。
溶剂错误:不能用水来溶解染料粉末,必须用无水DMSO。
染料水解:染料粉末或DMSO储存液受潮水解,已失效。
比例不佳:染料与蛋白质的比例需要优化。
问: 标记后我的蛋白质沉淀了或失活了怎么办?
答:这可能是过度标记导致的。染料是疏水的,在蛋白质表面连接过多的疏水染料分子会破坏其水合层,导致聚集沉淀,并可能遮盖其活性位点。降低染料/蛋白质的投料比重新尝试。
问: Cy3 NHS Ester 和 Cy3 maleimide 有什么区别?
答:这是两种不同的生物正交化学反应:
NHS Ester: 靶向 伯氨基 (-NH₂)。
Maleimide (马来酰亚胺): 靶向 巯基 (-SH)。
选择取决于您想要标记的靶点。标记蛋白质通常首选NHS酯,如果需要位点特异性标记,则可能选择Maleimide来标记。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)