FITC-卵清蛋白是一种通过化学偶联技术将荧光素异硫氰酸酯(FITC)与卵清蛋白(Ovalbumin)结合的荧光标记蛋白复合物,主要用于科研领域中卵清蛋白的可视化追踪与功能研究。
结构与合成
卵清蛋白:鸡蛋白主要蛋白,含多个赖氨酸残基(提供氨基反应位点)。
FITC:绿色荧光标记物(激发波长≈495 nm,发射波长≈519 nm),通过硫脲键(-NH-C(=S)-NH-)与卵清蛋白的氨基偶联。
荧光特性:
FITC标记后,复合物在495 nm激发光下发出绿色荧光(519 nm),可通过荧光显微镜、流式细胞术或荧光光谱仪检测。荧光强度与卵清蛋白的标记效率(每分子蛋白上的FITC数量)相关。
稳定性:
在生理条件(如PBS、细胞培养基)下,FITC-卵清蛋白的荧光稳定性较好,但需避免强酸、强光或高温导致荧光淬灭。长期储存建议避光、干燥、低温(如-20℃)。
应用场景
抗原追踪:通过荧光成像观察卵清蛋白在免疫器官(淋巴结、脾脏)的分布及抗原呈递过程。
过敏机制:追踪卵清蛋白与免疫细胞(如肥大细胞)的相互作用,揭示IgE介导的过敏反应。
载体标记:验证卵清蛋白基载体(如纳米粒)的靶向性及释放行为。
跨膜转运研究:观察载体在肠道/肺上皮细胞的转运机制。
蛋白相互作用:作为荧光探针研究卵清蛋白与抗体、受体的结合。
蛋白稳定性:追踪降解过程,评估蛋白药物稳定性。
实验注意事项
避光操作:FITC是一种光敏染料,长时间暴露在光下会发生光漂白,导致荧光淬灭。所有实验步骤(如孵育、洗涤、保存)都应在避光条件下进行(例如使用铝箔纸包裹容器)。
浓度优化:需要根据具体的细胞类型和实验目的进行浓度梯度实验,以确定最佳工作浓度。浓度过高可能导致非特异性结合或细胞毒性。
细胞内定位解释:需要注意的是,FITC的荧光在酸性环境中会淬灭。因此,当FITC-OVA进入酸性环境后,其绿色荧光信号会减弱甚至消失。
储存条件:通常建议分装后于-20°C避光保存,避免反复冻融。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)