FITC(异硫氰酸荧光素)的异硫氰酸酯基团(-N=C=S)可与半胱氨酸(Cysteine, Cys)的巯基(-SH)发生亲核反应,生成稳定的硫脲键。
反应条件:通常在弱碱性环境(pH 8-9)下进行,此时巯基的亲核性最强,反应效率最高。
选择性:相比氨基(-NH₂)标记(FITC与赖氨酸残基反应),巯基标记更具特异性,尤其适用于含游离巯基的蛋白质或小分子(如半胱氨酸、谷胱甘肽)。
荧光参数:
激发/发射波长:Ex ~495 nm / Em ~520 nm(与FITC一致)。适用于绿色荧光通道检测。
应用场景
巯基动态追踪与氧化还原研究:利用FITC-Cysteine的荧光特性,结合荧光显微镜或流式细胞术,追踪细胞内巯基的氧化还原变化。
含巯基生物分子的定位与功能分析:将FITC-Cysteine引入含巯基的蛋白质(如通过基因工程在特定位置插入半胱氨酸残基),通过荧光成像观察其在细胞内的定位(如细胞膜、细胞质)。
酶活性检测:对于依赖巯基的酶,FITC-Cysteine可作为底物或抑制剂,通过荧光变化检测酶活性。
生物材料修饰:将FITC-Cysteine固定于材料表面(如纳米颗粒、水凝胶),通过巯基的化学活性(如与金、硫醇化表面反应)实现荧光标记,同时保留巯基的生物相容性。
表面巯基检测:在材料科学中,FITC-Cysteine可作为探针检测材料表面的游离巯基,评估表面改性效果。
注意事项
标记条件优化:
避免过度标记(巯基被完全占用),需通过实验优化反应时间及FITC用量。还原剂处理需彻底,避免残留的二硫键干扰标记。
荧光稳定性:
FITC易受光照、pH变化影响,实验中需避光操作,并控制反应条件(如pH 7-8)。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)