FITC(荧光素异硫氰酸酯)标记的黄芩苷是一种将天然黄酮类化合物与荧光探针结合的修饰分子,可用于药物追踪、细胞摄取研究及靶点相互作用分析。
反应基团:FITC的异硫氰酸酯基(-N=C=S)与黄芩苷分子中的羟基(-OH)发生反应,形成稳定的硫酯键。
荧光特性:激发/发射波长:Ex≈490 nm, Em≈520 nm(与FITC一致)
溶解度:需用DMSO或DMF助溶,再用PBS稀释(避免直接用水溶解)
稳定性:避光4℃保存≤1周(短期运输);长期需分装冻存(-20℃)

应用场景
细胞摄取研究:观察黄芩苷在肿瘤细胞(如肝癌HepG2细胞)、炎症细胞(如巨噬细胞)或正常细胞中的摄取及亚细胞分布。
方法:
荧光显微镜:直接观察细胞内荧光信号,分析摄取动力学(如时间依赖性、浓度依赖性)。
流式细胞术:定量检测细胞内荧光强度,比较不同细胞类型的摄取差异。
亚细胞定位:与线粒体(如MitoTracker)、溶酶体(如LysoTracker)共染色,确认黄芩苷的作用靶点。
靶点验证:研究黄芩苷与炎症相关受体(如TLR4、NF-κB)或酶的相互作用。
方法:
荧光共定位:将FITC-黄芩苷与靶蛋白抗体(如TLR4-PE)共同标记细胞,通过共聚焦显微镜观察共定位信号。
竞争性结合实验:预孵育未标记黄芩苷,检测FITC-黄芩苷的荧光信号是否被抑制,验证结合特异性。
注意事项
活性保留:
氨基化修饰及FITC标记过程中需避免强酸、强碱或高温,以防黄芩苷的黄酮骨架被破坏。
可通过生物活性实验验证标记产物是否保留原药活性。
荧光稳定性:
标记产物需避光保存(-20℃)。
避免反复冻融,以防荧光淬灭。
对照实验:
设置未标记的黄芩苷及游离FITC作为对照,排除非特异性荧光干扰(如细胞自发荧光或FITC与细胞膜的非特异性结合)。
通过FITC标记,黄芩苷的生物分布及作用机制得以可视化,为天然产物的药理研究及药物开发提供了科研工具。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)