Cy3是一种应用的花青素类荧光染料,激发波长约为550-555 nm,发射波长约为570-575 nm(通常在绿色到橙色通道检测)。
几乎含有合适化学基团(主要是氨基或巯基)的分子都可以用Cy3标记。
蛋白质:
抗体: Cy3标记的抗体(尤其是一抗或二抗)用于免疫荧光显微术、流式细胞术、免疫组织化学/细胞化学。
重组蛋白: 用于研究蛋白-蛋白相互作用(如FRET实验)、蛋白定位、受体结合分析等。例如,细胞因子、生长因子、酶、结构蛋白等的标记形式。
凝集素: 用于标记糖基结构。
酶: 标记后用于追踪酶的活性或定位。
载体蛋白: 如BSA(牛血清白蛋白),常被标记后用作参照物或阻断剂。
核酸 (Nucleic Acids):
寡核苷酸探针: 用于荧光原位杂交、微阵列分析、实时定量PCR探针、Northern/Southern Blotting 等。标记位置可以是5'端、3'端或内部(通过氨基修饰的碱基)。
DNA片段/质粒: 用于追踪DNA转染效率、定位、研究DNA-蛋白相互作用。
RNA: 用于追踪RNA定位、降解研究(需注意RNA酶污染)。
适配体: 用于分子检测和成像。
肽 (Peptides):
用于研究肽的细胞摄取、受体结合、酶底物活性、蛋白相互作用等。标记位置通常在N端、C端或侧链(如有Lys或Cys)。
小分子化合物:
药物分子: 用于研究药物在细胞或组织中的分布、药代动力学、靶点结合。
代谢物/信号分子: 用于追踪它们在生物系统中的动态变化。
亲和配体: 标记后用于研究其与靶标的相互作用。
生物素: Cy3标记的生物素常与(链霉)亲和素结合使用。
亲和素/链霉亲和素 (Avidin/Streptavidin):
Cy3标记的链霉亲和素(或亲和素)是通用的工具。它可以识别并结合生物素化的分子,从而将Cy3荧光信号间接地连接到目标分子上。
凝集素 (Lectin):
Cy3标记的凝集素常用于特异性标记细胞表面的糖蛋白或糖脂,用于细胞成像和糖生物学研究。
纳米材料:
如金纳米颗粒、量子点(有时用作供体/受体与有机染料搭配)、脂质体等,可以通过表面修饰引入氨基或巯基,然后用Cy3标记,用于生物成像或传感。
标记化学:
Cy3的标记通常通过其衍生物上的活性基团与目标分子上的特定基团发生共价连接来实现。最常见的Cy3衍生物包括:
NHS酯衍生物: 与分子上的伯氨基(如赖氨酸侧链、蛋白质N端、氨基修饰的寡核苷酸)反应,形成稳定的酰胺键。这是常用、通用的标记方法。
马来酰亚胺衍生物: 与分子上的巯基(如半胱氨酸侧链、巯基修饰的寡核苷酸)反应,形成稳定的硫醚键。当需要位点特异性标记或避免氨基干扰时常用。
叠氮化物衍生物: 用于点击化学(如与炔烃修饰的分子通过CuAAC反应连接)。
酰肼衍生物: 特异性与醛基反应,常用于标记氧化的糖链(如糖蛋白上的聚糖)。
生物素衍生物: 本身已经连接生物素,用于与链霉亲和素结合。
以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)