Cy5.5-DBCO是Cy5-DBCO 的“近红外升级版”,二者核心功能相同(无铜点击化学标记),但光谱特性有显著差异,是否可替代需根据实验需求判断。
差异对比:
何时可替代?
需要更深的组织穿透
活体小鼠成像、厚组织切片 (>3 mm)优先选 Cy5.5-DBCO(700-900 nm 是“近红外窗口”)。
需要更低背景
如 高自发荧光样本,Cy5.5 的 710 nm 发射可避开大部分干扰。
多色实验中需光谱分离
若已有 CY3 (570 nm)、CY5 (670 nm),可用Cy5.5 (710 nm)替代 可避免串色。
何时不可替代?
依赖 CY5 标准检测通道
若设备仅配置 670/30 nm 滤光片(标准 CY5 通道),Cy5.5 信号会检测不全。
与 CY5 荧光蛋白共用
如同时监测610 nm或670 nm左右荧光,Cy5.5 可分离信号,但 Cy5 会与其重叠。
成本敏感
Cy5.5-DBCO 通常比 Cy5-DBCO贵很多。
使用注意事项(若替换)
仪器验证:确认显微镜/流式细胞仪有 700-720 nm 检测通道(需配置 710/50 nm 等滤光片)。
抗体/染料配对:避免与发射峰 650-690 nm 的染料(如 Alexa Fluor 680)共用,防止串色。
浓度优化:Cy5.5 摩尔消光系数略低于 Cy5,可能需要 提高 10-20% 工作浓度。
重要提醒:若实验涉及定量比较(如药物代谢动力学),Cy5与Cy5.5 的绝对荧光强度不可直接比较(需分别做标准曲线)。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)