CY3-乳酸是通过化学偶联技术，将Cyanine3荧光染料与乳酸分子进行共价连接而形成的荧光标记物。Cyanine3是一种菁类荧光染料，其分子结构中含有活性官能团，能够与乳酸分子上的氨基（经化学修饰引入）发生特异性反应，通过稳定的化学键连接，形成具有荧光特性的 CY3-乳酸分子。
它怎么用？（在科研中的应用）
Cy3-lactate主要用于实时、可视化地追踪乳酸在细胞或组织中的动态过程。其主要应用包括：
1.乳酸摄取与转运研究之可视化摄取过程：将Cy3-lactate 加入到活细胞培养基中，利用活细胞荧光显微成像 可以直接观察细胞摄取乳酸的速度、位置和模式。
2.乳酸在细胞内的定位与分布：
亚细胞定位：使用高分辨率显微镜（如共聚焦显微镜、超分辨显微镜），可以观察 Cy3-lactate 进入细胞后分布在哪些细胞器（如细胞质、线粒体附近等）。
组织分布：在体外模型（如类器官、组织切片）中，Cy3-lactate 可用于观察乳酸在不同细胞类型或组织区域间的分布和流动。
3.代谢示踪（有限度）：
虽然连接了Cy3大基团，但在某些情况下，Cy3-lactate 可能仍能被细胞代谢酶部分利用或转化。通过追踪其荧光信号的变化或结合其他代谢分析方法，可以间接提供一些乳酸代谢去向的信息。
使用步骤和注意事项（一般流程）：
储存与溶解：
通常以冻干粉形式提供。
严格避光！ Cy3 对光敏感，所有操作（溶解、稀释、孵育、成像）尽可能在暗处或弱光下进行。
常用溶剂是无水 DMSO，然后用缓冲液稀释到工作浓度。
（注意：现用现溶，溶解后尽快使用。避免溶解后保存）
成像/检测：
荧光显微镜/共聚焦显微镜：常用。使用 Cy3 的标准滤光片组（激发绿光，发射橘黄色荧光）。进行活细胞成像（需使用带环境控制的显微镜）或固定后成像（固定可能影响定位，需优化固定方法）。获取时间序列图像观察动态过程。
流式细胞术：用于快速、定量分析群体细胞的乳酸摄取水平。收集洗涤后的细胞，重悬于缓冲液中上机检测（通常使用 FITC/PE 通道检测 Cy3 信号）。
对照实验：
空白对照：未加任何探针的细胞，用于评估自发荧光和背景。
竞争抑制对照：在加入 Cy3-lactate 的同时或之前，加入过量未标记的乳酸，预期应抑制 Cy3 信号的摄取，证明摄取的特异性。
抑制剂/阻断剂对照：使用已知的乳酸转运蛋白抑制剂预处理细胞，再给予 Cy3-lactate，预期摄取减少。
细胞活性对照：确保实验浓度的 Cy3-lactate 和处理条件对细胞活力没有显著影响（可用台盼蓝、Calcein-AM/PI 等检测）。
特异性定位验证：如果关注亚细胞定位，可考虑与细胞器特异性染料共染，但要注意光谱重叠和串色问题。
局限性和注意事项：
非天然分子：Cy3标记可能改变乳酸的理化性质（大小、电荷、亲疏水性），影响其转运速率、亲和力及被代谢的能力。它反映的是标记乳酸类似物的行为，需谨慎推断至天然乳酸。
潜在的代谢干扰：大分子染料可能干扰细胞正常的代谢途径。
背景和非特异性结合：需要仔细优化洗涤步骤以减少背景。可能存在非特异性结合到细胞膜或胞内成分的情况。
光漂白与光毒性：长时间或高强度光照会使 Cy3 荧光衰减（光漂白），并可能产生损伤细胞的活性氧（光毒性）。需优化成像参数（如降低激光强度、缩短曝光时间、使用抗淬灭剂）。
定量挑战：荧光强度受多种因素影响（探针浓度、细胞厚度、仪器设置等），绝对定量比较困难，更适合相对定量（如比较不同处理组）。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
